1、目的：研究COX-2在胃腺癌組織中的表達，探討COX-2與PCNA，PGE2，VEGF，CD31，cyclinD1在胃腺癌發(fā)生發(fā)展中作用的相互關(guān)系。構(gòu)建COX-2的siRNA，檢測其在胃腺癌細胞株SGC-7901中對COX-2基因表達的抑制作用，以及敲低COX-2的表達后，觀察PGE2，PCNA，VEGF，CD31，cyclinD1的表達變化，以及細胞周期，增殖活性，凋亡，侵襲活性的變化，并進一步探討COX-2在胃腺癌細胞系中的作用機制

2、。應(yīng)用COX-2siRNA導(dǎo)入裸鼠胃腺癌皮下動物模型后，驗證在體內(nèi)COX-2siRNA對SGC-7901胃腺癌的抑制作用。 方法：第一部分構(gòu)造胃腺癌組織芯片，利用免疫組化檢測COX-2，PCNA，PGE2與VEGF的蛋白表達。第二部分在體外應(yīng)用RNA干涉技術(shù)以O(shè)ligofectamine介導(dǎo)siRNA靶向COX-2轉(zhuǎn)染人胃腺癌細胞系SGC-7901后，應(yīng)用realtimePCR檢測目的基因的敲低情況，并用Westernblot和

3、免疫熒光技術(shù)檢測了RNAi敲低COX-2的表達后，COX-2通路相關(guān)基因PCNA，PGE2，Bcl-2，CyclinD1與VEGF的表達變化。并用MTT、annexinV標記、流式細胞術(shù)及Matrigel3D生長實驗等方法分析了轉(zhuǎn)染前后細胞增殖、凋亡、細胞周期分布和侵襲能力的變化。第三部分中則通過建立裸鼠胃腺癌皮下動物模型，瘤內(nèi)注射Oligofectamine和siRNA的混合物，動態(tài)觀察腫瘤生長情況，檢測RNA干涉技術(shù)敲低SGC-79

4、01裸鼠胃腺癌COX-2的表達后PCNA，VEGF，CD31的表達變化；并應(yīng)用TUNEL法檢測細胞凋亡，對體外實驗的結(jié)果進一步驗證。 結(jié)果：1.COX-2在胃腺癌組織中過度表達(68.9％)，且隨組織的惡性分化程度升高而表達增強(X2=31.855，P<0.001)。COX-2在胃腺癌組織中的表達與癌旁組織及正常組織相比較具有差異性(X2=14.231，P=0.027)。PGE2，PCNA，VEGF(80.0％，84.4％和73

5、.3％)也在胃腺癌組織中呈現(xiàn)過表達的現(xiàn)象，同時，COX-2，PCNA，PGE2與VEGF表達之間存在正相關(guān)性。2.realtimePCR結(jié)果提示，轉(zhuǎn)染COX-2siRNA后可明顯敲低COX-2mRNA的表達。MTT結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染COX-2siRNA后細胞增殖率與轉(zhuǎn)染nonsensesiRNA和對照組相比明顯受抑制(P<0.05)，通過Westernblot和免疫熒光檢測發(fā)現(xiàn)除COX-2的蛋白明顯敲低外，COX-2通路相關(guān)基因PCNA，PG

6、E2，Bcl-2，CyclinD1與VEGF的表達水平均明顯降低。應(yīng)用AnnexinV檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染COX-2siRNA組細胞凋亡率明顯升高，進一步應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測細胞周期分布發(fā)現(xiàn)S期細胞比例降低，細胞阻滯于G0/G1期。侵襲試驗結(jié)果顯示COX-2siRNA可明顯抑制SGC-7901細胞的侵襲。3.成功建立胃腺癌SGC-7901細胞系裸鼠皮下腫瘤模型后，每4天測量一次腫瘤體積，并在腫瘤局部多點注射siRNA和Oligofectamine

7、混合物，發(fā)現(xiàn)和對照組相比，COX-2siRNA治療組腫瘤生長緩慢，從治療后的第15天起，腫瘤體積出現(xiàn)明顯差別，這種差別在觀察末期(30天)最顯著。應(yīng)用免疫組化法檢測腫瘤標本，發(fā)現(xiàn)COX-2的蛋白明顯敲低的同時，PCNA，CD31，VEGF表達水平均明顯降低。應(yīng)用TUNEL法檢測原位細胞凋亡發(fā)現(xiàn)COX-2siRNA治療組凋亡細胞明顯增加。體內(nèi)和體外實驗的結(jié)果一致。 結(jié)論：1.COX-2，PCNA，PGE2，VEGF的表達上調(diào)與胃腺

8、癌的分化的嚴重程度、發(fā)生與進展呈正相關(guān)。2.應(yīng)用以O(shè)ligofectamine介導(dǎo)的RNA干涉技術(shù)轉(zhuǎn)染siRNA靶向COX-2可有效敲低COX-2在胃腺癌SGC-7901細胞內(nèi)的表達，同時抑制PCNA，PGE2，Bcl-2，CyclinD1與VEGF的表達活性，從而抑制了細胞的增殖和侵襲，出現(xiàn)G0/G1期阻滯，并誘發(fā)細胞凋亡。3.裸鼠皮下胃腺癌模型應(yīng)用Oligofectamine介導(dǎo)的COX-2siRNA治療，同樣可有效敲低COX-2的