1、目的：
　　 糖尿病(diabetes mellitus，DM)及其并發(fā)癥嚴重危害著人們的身體健康及生活質量，糖尿病腎病(diabetic nephropath，DN)是DM的主要微血管并發(fā)癥，是腎功能衰竭的主要原因之一。其主要病理改變是細胞外基質(Extracel lularMatrix，ECM)積聚和基底膜增厚。目前認為，ECM的合成和降解受多種細胞因子（如TGF-β1、c-fos、炎癥因子等）和多條信號通路（如Smad和M

2、APK通路等）的影響，是一個復雜的病理過程。
　　 Ⅳ型膠原是ECM的主要成分，也是衡量ECM積聚的主要指標。TGF-β超家族在DN腎小球硬化和腎間質纖維化中發(fā)揮重要作用，TGF-β主要靠其下游的Smad信號傳導通路來發(fā)揮作用，Smad2、Smad3是主要的信號傳導分子。c-fos是細胞核內重要的原癌基因，介導許多與免疫反應有關的細胞因子基因的轉錄活化過程，并促進炎癥的發(fā)生。另外，DN是一種炎癥性疾病，已得到諸多學者的認可，其中

3、白細胞介素-6（interleukin-6，IL-6）和細胞間粘附分子-1（intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1）作為重要的炎癥介質，也與DN的發(fā)生和發(fā)展相關。
　　 G蛋白偶聯受體(G protein coupled receptor，GPCR)是與GTP調節(jié)蛋白相關的跨膜受體超分子家族，包括α1、β1、AT1受體等。大量報道顯示，腎損害與GPCR自身抗體有關，使用相應的受體拮抗劑能

4、在一定程度起到腎臟保護作用，其中以高血壓腎損害與GPCR自身抗體之間的關系研究最多，DN腎損害與GPCR自身抗體之間的關系研究相對較少。
　　 多沙唑嗪為α1受體阻滯劑，能夠高度選擇性、不可逆的與α1受體結合，在臨床上廣泛用于高血壓病的治療。我們課題組已在前期的動物試驗中證實，多沙唑嗪可與α1-受體自身抗體(autoantibodies againstα1-adrenergicreceptor，α1-AA)競爭性的結合于α1-受

5、體上，阻斷由α1-AA注射入鼠體內導致的TGF-β1的高表達及相關信號轉導通路，最終阻斷腎基質重構。但其在DN中的作用機制目前還沒有完全闡明。
　　 本實驗建立了大鼠DN的模型，采用體內注射α1-AA的方法對大鼠進行介導，繼續(xù)深入研究α1-AA介導對DN大鼠腎組織Ⅳ型膠原、Smad2/3、c-fos蛋白表達及血清IL-6、ICAM-1水平的影響，及應用多沙唑嗪干預的腎臟保護作用及機制，期望能為進一步研究DN發(fā)病機制打下基礎。

6、r>　　 方法：
　　 第一章α1-AA介導對糖尿病鼠腎組織Ⅳ型膠原、Smad2/3、c-fos及相關炎癥因子表達的影響動物分為健康鼠空白對照組（N組）、DM鼠無α1-AA介導組（DM組）及DM鼠α1-AA介導組（DM+α1-AA組）。采用STZ注射法制備動物模型。造模成功后:DM+α1-AA介導組在0、4、8、12、16周鼠尾靜脈一次性注射α1-AA，100μg/100g體重。觀察大鼠一般情況，實驗結束時放射免疫法測定24小

7、時尿蛋白(24 hoururine protein，24hUpro)、血清肌酐值(Serum creatinine，SCr)，免疫組化法檢測大鼠腎組織中Ⅳ型膠原、Smad2/3、c-fos蛋白分布及表達情況，ELISA法測定血清α1-AA、IL-6、ICAM-1水平，并在電鏡下觀察各實驗組腎組織近曲小管、遠曲小管及腎小球的改變。
　　 第二章α1-受體拮抗劑對糖尿病鼠腎組織Ⅳ型膠原、Smad2/3及c-fos表達的影響DM動物模

8、型建立及α1-AA介導方法同第一章。造模成功后，動物分為DM鼠無α1-AA介導組（單純DM組）、DM鼠α1-AA介導組（DM+α1-AA組）、DM鼠α1-AA介導+多沙唑嗪干預組（DM+α1-AA+多沙唑嗪組）及DM鼠無α1-AA介導多沙唑嗪干預組（DM+多沙唑嗪組），并設立健康鼠空白對照組（N組）;DM+α1-AA+多沙唑嗪干預組、DM鼠+多沙唑嗪組按0.36mg/kg給藥劑量、10ml/kg大鼠給藥容量灌胃給藥，1/d，連續(xù)16周。

9、實驗結束時放射免疫法測定24hUpro、SCr，免疫組化法檢測大鼠腎組織中Ⅳ型膠原、Smad2/3、c-fos蛋白分布及表達情況，并在電鏡下觀察各實驗組腎組織近曲小管、遠曲小管及腎小球的改變。
　　 第三章α1-受體拮抗劑對糖尿病鼠血清IL-6和ICAM-1表達的影響實驗結束時取血，ELISA法檢測血清IL-6、ICAM-1表達，余同第二章。
　　 結果：
　　 第一章α1-AA介導對糖尿病鼠腎組織Ⅳ型膠原、Sm

10、ad2/3、c-fos及相關炎癥因子表達的影響
　　 1、各組大鼠體重、FBG比較DM大鼠高糖高脂飼料喂養(yǎng)4周后，體重顯著增加，注射STZ后體重開始下降，DM+α1-AA組體重下降明顯，在實驗結束時，DM+α1-AA組與DM組體重差異有統計學意義。造模后，DM大鼠FBG均達到16.7mmol/L以上，并且一直維持在一個較高水平，與N組相比差異有統計學意義;DM+α1-AA組與DM組大鼠血糖無明顯差異。
　　 2、各組SC

11、r和24hUpro比較實驗結束時，DM組和DM+α1-AA組大鼠的Scr和24hUpro較N組均顯著升高，DM+α1-AA組與DM組相比，上述指標升高更明顯。
　　 3、各組電鏡下腎臟組織病理學改變電鏡下N組未見明顯異常，DM組可見輕度異常，DM+α1-AA組微觀結構嚴重破壞。
　　 4、各組腎臟組織免疫組化結果N組腎組織無明顯染色;DM組與N組比較，可在腎小球及腎小管內見大量的陽性細胞，DM+α1-AA介導組大鼠腎組織

12、廣泛強陽性表達，顯著高于DM組。
　　 5、ELISA結果造模后大鼠血清IL-6及ICAM-1水平升高，DM+α1-AA組大鼠血清IL-6及ICAM-1水平著高于DM組。
　　 第二章α1-受體拮抗劑對糖尿病鼠腎組織Ⅳ型膠原、Smad2/3及c-fos表達的影響
　　 1、各組大鼠實驗前、后體重的變化造模后，各組大鼠體重較實驗前均有顯著下降;實驗后，單純DM組、DM+α1-AA組較DM+α1-AA+多沙唑嗪組、D

13、M+多沙唑嗪組下降明顯，DM+α1-AA+多沙唑嗪組、DM+多沙唑嗪組比較，差異無明顯統計學意義。
　　 2、各組SCr和24hUpro比較DM大鼠Scr和24hUpro均顯著升高。DM+α1-AA組與DM+α1-AA+多沙唑嗪組比較，Scr和24hUpro較高，差異有統計學意義，單純DM組、DM+α1-AA+多沙唑嗪組、DM+多沙唑嗪組比較，差異無明顯統計學意義。
　　 3、各組電鏡下腎臟組織病理學改變N組大鼠腎臟超微

14、結構清晰，細胞結構正常。單純DM組足突融合，系膜基質增多、腫脹，系膜區(qū)擴大，可見高密度電子沉積物，基底膜局部增厚。DM+α1-AA介導組足細胞的損傷相對單純DM組更加嚴重，細胞明顯腫脹，細胞器溶解，溶酶體增多，內皮細胞空泡變性，細胞器溶解，微絨毛腫脹，基底膜明顯增厚。多沙唑嗪干預后病變明顯減輕。DM+多沙唑嗪組也有系膜區(qū)擴大，基底膜局部增厚等結構改變。
　　 4、各組腎臟組織Ⅳ型膠原、Smad2/3及c-fos的表達結果N組腎組

15、織無明顯或僅有較弱陽性表達;單純DM組可在腎小球及腎小管內見大量的陽性細胞，DM+α1-AA介導組大鼠腎組織廣泛強陽性表達。DM+α1-AA+多沙唑嗪干預組、DM+多沙唑嗪干預組與單純DM組、DM+α1-AA介導組比較陽性表達顯著改善;DM+α1-AA+多沙唑嗪干預組與DM+多沙唑嗪干預組比較，差異無明顯統計學意義。
　　 第三章α1-受體拮抗劑對糖尿病鼠血清IL-6和ICAM-1表達的影響
　　 1、各組大鼠24hUp

16、ro及KW/BW比較DM大鼠24hUpro及KW/BW均較N組顯著升高。DM+α1-AA組與DM+α1-AA+多沙唑嗪組比較，24hUpro及KW/BW較高，差異有統計學意義，單純DM組、DM+α1-AA+多沙唑嗪組、DM+多沙唑嗪組比較，差異無統計學意義。
　　 2、各組大鼠血清IL-6及ICAM-1含量比較造模后大鼠血清IL-6和ICAM-1水平升高，多沙唑嗪干預后出現不同程度的降低。DM+α1-AA組大鼠血清兩種炎癥介質水

17、平，顯著高于單純DM組，DM+α1-AA組與DM+α1-AA+多沙唑嗪比較，后者IL-6下降明顯，DM+α1-AA+多沙唑嗪、DM+多沙唑嗪與單純DM組比較，差異無明顯統計學意義。ICAM-1結果與IL-6結果相同，單純DM與DM+α1-AA組比較、DM+α1-AA組比較與DM+α1-AA+多沙唑嗪比較均有統計學差異。
　　 3、各組24hUpro、KW/BW分別與血清IL-6及ICAM-1含量進行相關性分析相關性分析結果顯示:

18、24hUpro與IL-6、ICAM-1水平呈正相關;KW/BW與IL-6、ICAM-1水平呈正相關。
　　 4、各組電鏡下腎臟組織病理學改變同第二章。
　　 結論：
　　 1、DN既是一種免疫反應，又是一種炎癥反應，兩者密切聯系并且正相關。
　　 2、注射入鼠體內的α1-AA可能通過MAPK、TGF-β1/smad通路及GPCR之間的信號轉導，誘導Ⅳ型膠原、Smad2/3和c-fos的表達增多，最終導致腎