1、目的:血管平滑肌細胞(Vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖及表型轉(zhuǎn)化在肺動脈高壓、高血壓、動脈粥樣硬化及冠狀動脈成形術(shù)后再狹窄等的形成過程中具有重要作用,而衰老、缺氧及內(nèi)毒素分別是疾病發(fā)生的獨立危險因素.該實驗探討衰老、缺氧及內(nèi)毒素對體外培養(yǎng)的肺動脈平滑肌細胞(Pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMC)的影響,特別是對PASMC的增殖、轉(zhuǎn)化、c-fos和c

2、-jun原癌基因的影響,并嘗試用D-半乳糖刺激青年P(guān)ASMC建立衰老PASMC模型,為進一步在細胞水平研究人類衰老自然過程及病理過程的機理提供理論和實驗依據(jù).結(jié)論:1、同青年大鼠的PASMC相比,老年大鼠分離培養(yǎng)的PASMC在體外有更高的增殖水平,更多的細胞由收縮型轉(zhuǎn)化為增殖型,細胞大體形態(tài)和細胞骨架無明顯差異;c-fos mRNA水平和c-fos蛋白表達也相應(yīng)增加,說明c-fos同平滑肌細胞的衰老有密切關(guān)系;c-jun mRNA水平和

3、c-jun蛋白兩者相比并無統(tǒng)計學(xué)意義,說明c-jun在平滑肌細胞衰老的進程中的作用還值得進一步商討.說明老年P(guān)ASMC本身就具有較高的增殖水平,且比較容易由收縮型向增殖型轉(zhuǎn)化.2、短時間的缺氧刺激(6小時內(nèi))對細胞生長有抑制作用,6小時后能直接刺激PASMC增殖加速,并使細胞的SM-α-actin減少,細胞由收縮型向增殖型轉(zhuǎn)化增加;c-fos和c-jun mRNA水平和c-fos和c-jun蛋白表達也相應(yīng)增加,從分子水平說明了缺氧引起細

4、胞增殖水平增加;老年細胞受缺氧刺激敏感,增殖最快,細胞表型轉(zhuǎn)化比例也最大.提示在慢性阻塞性肺疾病中,缺氧本身就是一個刺激PASMC增生和轉(zhuǎn)化的重要因素.3、短時間的內(nèi)毒素刺激(12小時內(nèi))對細胞生長有抑制作用,然而在適當(dāng)濃度內(nèi)毒素刺激下,PASMC 12小時后增殖速度加快,轉(zhuǎn)化為增殖型的細胞明顯增加,c-fos和c-jun mRNA水平和c-fos和c-jun蛋白表達也增加,從分子水平說明內(nèi)毒素刺激也可以引起細胞增殖水平增加.同樣,老年

5、細胞受內(nèi)毒素刺激后,增殖最為明顯,由收縮型向增殖型轉(zhuǎn)化也較多.這些變化在一定程度上證實和解釋了肺部感染或全身感染后肺動脈或其它血管平滑肌的增殖現(xiàn)象.4、用一定濃度的D-半乳糖刺激青年大鼠的PASMC,大體觀察和細胞骨架的染色檢測無明顯區(qū)別,生長曲線與細胞內(nèi)SM-α-actin水平都比較接近老年大鼠分離培養(yǎng)的PASMC,而且c-fos和c-jun mRNA水平和c-fos和c-jun蛋白表達水平也比較接近.D-葡萄糖處理的對照組未出現(xiàn)上述