1、目的：探討莪術(shù)油注射液對(duì)體外培養(yǎng)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，從細(xì)胞脹亡角度來(lái)考察細(xì)胞生長(zhǎng)抑制的機(jī)制，并初步研究莪術(shù)油注射液誘導(dǎo)SKOV3細(xì)胞發(fā)生脹亡的分子機(jī)制。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)以不同的藥物濃度作用人卵巢癌SKOV3細(xì)胞株后，采用MTT法檢測(cè)莪術(shù)油注射液對(duì) SKOV3細(xì)胞的抑制增殖作用；通過(guò)倒臵顯微鏡觀察細(xì)胞在培養(yǎng)液中的形態(tài)學(xué)變化；以熒光顯微鏡觀察 AO染色后細(xì)胞核的形態(tài)變化；對(duì)細(xì)胞進(jìn)行HE染色后通過(guò)光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形

2、態(tài)學(xué)變化；通過(guò)透射電鏡觀察細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)變化和計(jì)數(shù)脹亡指數(shù)；通過(guò)DNA凝膠電泳觀察細(xì)胞DNA斷裂的特征；通過(guò)免疫組化法檢測(cè)細(xì)胞bcl-2基因表達(dá)水平；通過(guò)全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)液上清液乳酸脫氫酶（LDH）水平；熒光染料2',7'-二氯熒光素乙二酯、10-壬基吖啶橙結(jié)合熒光化學(xué)發(fā)光儀分別檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧（ROS）及線(xiàn)粒體心磷脂（MTCL）水平。
　　結(jié)果：①莪術(shù)油注射液對(duì)SKOV3細(xì)胞體外生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，其抑制作用隨濃

3、度的增加而不斷加強(qiáng)，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系，其中48h半數(shù)抑制濃度（IC50）為55.16ug/ml；②選擇31.25、62.5、125μg/ml濃度的莪術(shù)油作用細(xì)胞48h后倒臵顯微鏡觀察，大體可見(jiàn)細(xì)胞密度明顯減少，胞體變長(zhǎng),細(xì)胞內(nèi)顆粒感增強(qiáng)，細(xì)胞界限模糊,細(xì)胞間隙逐漸增寬，細(xì)胞質(zhì)減少,胞漿減少,細(xì)胞脫落呈懸浮狀,存活細(xì)胞減少，細(xì)胞核碎裂，可見(jiàn)細(xì)胞碎片，隨著莪術(shù)油作用濃度的增加，上述現(xiàn)象更加明顯；③選擇31.25、62.5、125μg/ml

4、濃度的莪術(shù)油作用細(xì)胞48h后熒光顯微鏡觀察，主要變化為細(xì)胞腫脹，體積增大，胞膜面積縮小，核染色質(zhì)分散擴(kuò)大；④選擇31.25、62.5、125μg/ml濃度的莪術(shù)油作用細(xì)胞48h后HE染色普通光鏡觀察，主要變化為細(xì)胞腫脹，體積增大，胞漿空泡化，胞漿內(nèi)出現(xiàn)致密顆粒，胞質(zhì)空泡化，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹；細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)分散，凝集在核膜、核仁周?chē)?，有時(shí)聚集成團(tuán)塊；胞膜起泡，通透性增加，細(xì)胞膜完整性破壞、胞膜崩解，最后細(xì)胞核溶解；⑤選擇31.25、62.5、1

5、25μg/ml濃度的莪術(shù)油作用細(xì)胞48h后透射電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)卵巢癌細(xì)胞胞體腫脹，細(xì)胞膜空泡化，細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)蟲(chóng)蝕狀和空泡化，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，線(xiàn)粒體腫脹，嵴破壞，數(shù)量減少，細(xì)胞核染色質(zhì)分散，凝集在核膜、核仁周?chē)?，甚至核膜完整性破壞，結(jié)構(gòu)崩解，核溶解性，細(xì)胞內(nèi)容物逸出的典型脹亡細(xì)胞形態(tài)。其細(xì)胞脹亡指數(shù)(OI)隨濃度的增加而增大，呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系；⑥選擇31.25、55.16、62.5、125μg/ml濃度的莪術(shù)油作用細(xì)胞48h后瓊脂糖電泳結(jié)果

6、，SKOV3細(xì)胞DNA條帶均呈彌漫型；⑦免疫組化結(jié)果表明：各莪術(shù)油注射液組細(xì)胞中Bcl-2蛋白免疫組化染色綜合得分與空白組比較下降，提示莪術(shù)油注射液具有下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)的作用；⑧全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)結(jié)果表明：與空白組比較，各莪術(shù)油注射液組細(xì)胞培養(yǎng)液上清液乳酸脫氫酶數(shù)值均升高，并且隨莪術(shù)油注射液劑量的增加而升高，提示莪術(shù)油注射液能使LDH從SKOV3細(xì)胞中漏出；⑨熒光化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)結(jié)果表明：各莪術(shù)油注射液組SKOV3細(xì)胞內(nèi)ROS的數(shù)

7、值均增加，并且隨莪術(shù)油注射液劑量的增大而增加，提示莪術(shù)油注射液具有增加細(xì)胞內(nèi)ROS含量的作用；各莪術(shù)油注射液組SKOV3細(xì)胞內(nèi)MTCL數(shù)值與空白組比較均下降，并且隨莪術(shù)油注射液劑量的增加逐漸下降，提示莪術(shù)油注射液具有降低細(xì)胞內(nèi)MTCL含量的作用。
　　結(jié)論：①莪術(shù)油注射液對(duì) SKOV3細(xì)胞體外生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，抑制作用呈量效關(guān)系，其中48h半數(shù)抑制濃度（IC50）為55.16ug/ml；②莪術(shù)油注射液可使培養(yǎng)液中的SKOV3

8、細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞裂解現(xiàn)象，并隨著莪術(shù)油注射液作用濃度的增加更加明顯；③莪術(shù)油注射液導(dǎo)致SKOV3細(xì)胞出現(xiàn)細(xì)胞脹亡，脹亡指數(shù)有劑量依賴(lài)性；④莪術(shù)油注射液能下調(diào)Bcl-2蛋白表達(dá)；⑤莪術(shù)油注射液能促進(jìn)LDH從SKOV3細(xì)胞中漏出，漏出量有劑量依賴(lài)性；⑥莪術(shù)油注射液能增加細(xì)胞內(nèi)ROS含量，含量有劑量依賴(lài)性；⑦莪術(shù)油注射液能降低細(xì)胞內(nèi)MTCL含量，含量有劑量依賴(lài)性?？傊?，莪術(shù)油注射液能導(dǎo)致體外培養(yǎng)的SKOV3細(xì)胞脹亡，并能下調(diào)細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)