1、紅系分化是指由造血干細(xì)胞發(fā)育為成熟紅細(xì)胞的過程。這一過程受到細(xì)胞內(nèi)多種基因和細(xì)胞因子的調(diào)控，其機(jī)制尚未闡明。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)技術(shù)近年來成為研究基因功能的有力工具，并且從對(duì)單一基因的研究迅速擴(kuò)展到全基因組水平的功能研究。本課題組之前報(bào)道了利用隨機(jī)siRNA文庫高通量篩選誘導(dǎo)人髓性白血病K562細(xì)胞系向紅系分化的siRNA，兩個(gè)siRNA（siRNAclone-60和siRNAclone-67）被證實(shí)能

2、夠誘導(dǎo)K562細(xì)胞向紅系分化。我們進(jìn)一步尋找了這兩個(gè)siRNA可能作用的靶基因且驗(yàn)證了這些基因的功能，希望能為腫瘤細(xì)胞的誘導(dǎo)分化治療及紅系分化機(jī)制的研究提供新的資料。
　　 我們利用全基因組表達(dá)譜芯片分析、標(biāo)記siRNA親和純化等方法找到了siRNAclone-67與clone-60可能的一些下游靶基因，并對(duì)其中部分基因進(jìn)行了功能驗(yàn)證。CCDC12和SLC30A3是我們通過以上途徑找到的兩個(gè)可能的靶基因。CCDC12編碼一個(gè)含有

3、卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域的蛋白，而SLC30A3編碼鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白3(ZNT3)，在神經(jīng)系統(tǒng)高級(jí)活動(dòng)如學(xué)習(xí)、記憶中起重要作用，目前尚無任何文獻(xiàn)報(bào)道這兩種基因與紅系分化相關(guān)。
　　 本文驗(yàn)證了CCDC12、SLC30A3具有促進(jìn)人K562細(xì)胞向紅系分化的功能。結(jié)果顯示過表達(dá)CCDC12和SLC30A3使K562細(xì)胞的紅系分化特異標(biāo)志CD235的表達(dá)升高，其中過表達(dá)CCDC12后CD235陽性細(xì)胞率由對(duì)照組的32.25％增加至78.07%，過表達(dá)

4、SLC30A3后CD235陽性細(xì)胞率由對(duì)照組的34.25%增加至95.7%；同時(shí)過表達(dá)CCDC12細(xì)胞ε一、γ-珠蛋白的表達(dá)升高，而過表達(dá)SLC30A3細(xì)胞ε-、γ-和β-珠蛋白的表達(dá)均明顯升高；過表達(dá)CCDC12和SLC30A3細(xì)胞紅系分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子GATA-2的表達(dá)均降低。此外過表達(dá)CCDC12和SLC30A3的細(xì)胞增殖速度加快。
　　 綜上所述，本文根據(jù)兩種可誘導(dǎo)K562紅系分化的siRNA，找到了其可能的靶基因，并驗(yàn)證