1、背景和目的: 心肌梗死(myocardial infarction，MI)是目前嚴(yán)重危害人類健康的疾病之一。由于成體心肌細(xì)胞缺乏足夠的再生能力，因而梗死后將導(dǎo)致心肌細(xì)胞不可逆的丟失，并被纖維瘢痕組織取代，最終導(dǎo)致心力衰竭。因此對(duì)于治療重癥心肌損傷和終末期心力衰竭，如果我們能夠通過(guò)一些途徑最大限度的減少心肌細(xì)胞死亡的數(shù)量；促進(jìn)頓抑和冬眠心肌功能恢復(fù)；刺激缺血區(qū)域血管新生；補(bǔ)充再生的心肌細(xì)胞到壞死區(qū)域，將會(huì)減少急性心肌梗死后心肌瘢痕

2、化的形成，從而減少心室重構(gòu)，改善心臟功能。大量的研究都已經(jīng)證實(shí)胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞移植都可以修復(fù)梗死心肌，改善心功能。其中，研究表明骨髓來(lái)源的或血液來(lái)源的內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial Progenitor Cells，EPCs)有助于增強(qiáng)缺血心肌的血管新生。但是移植細(xì)胞的存活和進(jìn)一步分化成熟很大程度上決定于局部微環(huán)境及移植細(xì)胞本身的功能。因此，如果能在細(xì)胞移植期間積極改善EPCs的局部微環(huán)境并增強(qiáng)其功能，將會(huì)促進(jìn)移植細(xì)胞發(fā)揮更大

3、的有益作用。而研究表明他汀類藥物還發(fā)揮著獨(dú)立于降脂以外的多效性作用(pleiotropic effect)，包括抗炎、改善內(nèi)皮功能及增強(qiáng)EPCs的功能等等。本實(shí)驗(yàn)的目的：旨在利用他汀類藥物的多效性作用可能對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞帶來(lái)的有益作用，通過(guò)自體內(nèi)皮祖細(xì)胞移植聯(lián)合他汀類藥物治療大鼠急性心肌梗死，以觀察其能否促進(jìn)更多的移植細(xì)胞存活，從而進(jìn)一步改善心功能，進(jìn)而比較聯(lián)合他汀類藥物與未聯(lián)合他汀類藥物的EPCs移植對(duì)心肌梗死后心功能的影響，探討其修復(fù)作

4、用和機(jī)理。 方法:選取鄭州大學(xué)醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心培育的雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠(150-200g)為研究對(duì)象，飼以正常飲食，隨機(jī)分為三組，每組10只，分為心肌梗死對(duì)照組(組Ⅰ)、單純內(nèi)皮祖細(xì)胞移植組(組Ⅱ)、他汀類藥物與內(nèi)皮祖細(xì)胞移植聯(lián)合治療組(組Ⅲ)。經(jīng)10﹪的水合氯醛腹腔麻醉，仰臥位固定在手術(shù)臺(tái)上，無(wú)菌心臟采血3ml，肝素抗凝，用磷酸二氫鹽緩沖液(phosphate buffer saline，PBS

5、)稀釋1倍后，應(yīng)用Ficoll密度梯度離心的方法獲得單個(gè)核細(xì)胞，種植于纖維連接蛋白包被的培養(yǎng)板上，體外培養(yǎng)擴(kuò)增，獲得較純的EPCs，以5-溴-2’-脫氧尿嘧啶核苷(5-Bromo-2’-deoxyuridine，BrdU)標(biāo)記。結(jié)扎大鼠左冠狀動(dòng)脈前降支，制造大鼠急性心肌梗死模型。組Ⅱ、組Ⅲ在心梗模型制備后，于梗死周邊區(qū)(心肌顏色蒼白區(qū)周邊)分六點(diǎn)注射內(nèi)皮祖細(xì)胞，每點(diǎn)注射50μl，組Ⅰ只注射等量培養(yǎng)液。組Ⅲ完成上述步驟24h后，以阿托伐他

6、汀50mg/kg/day灌胃8周。8周后用二維超聲心動(dòng)圖觀察大鼠心功能的改變，8道生理記錄儀測(cè)定血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)。然后處死大鼠，以免疫組化方法檢測(cè)心肌內(nèi)EPCs及大鼠心肌修復(fù)情況。 結(jié)果: (1) 心肌梗死模型建立8周后，超聲可見單純EPCs移植組、ENs+阿托伐他汀聯(lián)合治療組心功能得到明顯改善，射血分?jǐn)?shù)(ejection fraction，EF)、左室短軸縮短率(fractional shortening，F(xiàn)S)較對(duì)照組

7、均有明顯提高(p<0.05)，且EPCs+阿托伐他汀聯(lián)合治療組提高更顯著(p<0.05)。 (2) 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)測(cè)定顯示：與對(duì)照組相比，單純EPCs移植組、EPCs+阿托伐他汀聯(lián)合治療組左室收縮壓(left ventricular svstolic pressure，LVSP)、壓力變化速率最大值(±dp/dtmax)均明顯升高(p<0.05)，而左室舒張末壓(left ventricular end-diastolic pr

8、essure，LVEDP)明顯降低(p<0.05)，且EPCs+阿托伐他汀聯(lián)合治療組改變更顯著(p<0.05)，提示左室收縮舒張功能均明顯改善。 (3)細(xì)胞移植8周后BrdU染色發(fā)現(xiàn)，在組Ⅱ與組Ⅲ的心肌梗死區(qū)域內(nèi)可見BrcIU陽(yáng)性移植細(xì)胞分布，提示移植細(xì)胞在心肌組織內(nèi)得以存活，部分細(xì)胞已結(jié)合到新生的血管壁上，參與了局部血管再生過(guò)程。而心肌梗死對(duì)照組(組Ⅰ)未見BrdU陽(yáng)性細(xì)胞分布，且該組梗死區(qū)域纖維化明顯。 結(jié)論:

9、 (1)可通過(guò)外周血分離單個(gè)核細(xì)胞后經(jīng)一系列體外培養(yǎng)過(guò)程來(lái)獲得較純化的內(nèi)皮祖細(xì)胞，并且可擴(kuò)增到適當(dāng)數(shù)量. (2)缺血心肌局部移植內(nèi)皮祖細(xì)胞可以通過(guò)促進(jìn)局部心肌組織血管新生使心肌梗死后大鼠心功能得以改善。說(shuō)明EPCs植入后有明顯的修復(fù)作用。 (3)內(nèi)皮祖細(xì)胞移植聯(lián)合他汀類藥物治療心肌梗死，能夠顯著改善移植細(xì)胞的生存微環(huán)境，促使更多的移植細(xì)胞存活且增強(qiáng)移植細(xì)胞的功能和保護(hù)現(xiàn)有的心肌細(xì)胞，從而明顯縮小心肌梗死面積、抑制心室重