1、中圖分類號R 7 4 3 ．3 4U D C 6 1 0學校代碼1 0 5 3 3密級 公開碩士學位論文成體神經(jīng)干細胞移植治療大鼠腦出血實驗研究E x p e r i m e n t a l S t u d y o n A d u l t N e u r a lS t e mC e l l sT r a n s p l a n t a t i o n i nR a t w i t h I n t r a c e r e b r a lH

2、 e m o r r h a g e作者姓名 學科專業(yè) 研究方向學院( 系、所)指導教師彭俊臨床醫(yī)學外科學( 神經(jīng)外科)湘雅醫(yī)學院附屬海L ] 醫(yī)院夏鷹教授論文答辯日期：絲出15 ：．歹口 答辯委員會主席：中 南 大 學2 0 1 3 年5 月成體神經(jīng)干細胞移植治療大鼠腦出血實驗研究摘要目的：評估成體神經(jīng)干細胞移植治療大鼠腦出血療效，觀察移植的成體神經(jīng)干細胞在大鼠腦內分化方向。方法：①取成年大鼠海馬齒狀回，通過機械分離及胰酶消化法制備單

3、細胞懸液；密度梯度離心及培養(yǎng)基選擇法獲取成體神經(jīng)干細胞懸液；體外培養(yǎng)、鑒定及標記。②自體血紋狀體注入法制作大鼠腦出血模型2 0 只，選取L O N G A 評分相同的模型鼠1 0 只，隨機分為實驗組( 注入神經(jīng)干細胞) 和對照組( 注入等量生理鹽水) 各5 只，術后2 4 小時，將體外培養(yǎng)并標記的大鼠成體神經(jīng)干細胞通過立體定向腦實質移植法移植入大鼠腦內血腫周圍。③術后每周，連續(xù)7 周，采用旋轉實驗及肢體放置實驗對大鼠進行行為學測試，以觀

4、察大鼠神經(jīng)功能恢復狀況；7 周后行免疫組化檢測移植的成體神經(jīng)干細胞在實驗組大鼠腦內的分化方向。結果：①成體神經(jīng)干細胞在體外懸浮培養(yǎng)時逐漸成球生艮，當克隆球直徑達到1 6 0 ±l O u m 時，部分成體神經(jīng)干細胞開始長出突起，克隆球中央細胞因缺乏營養(yǎng)開始死亡，傳至第三代時，細胞仍能保持較高的增殖能力。②自體血注入大鼠腦內紋狀體后，大鼠出現(xiàn)明顯腦出血癥狀及體征。③成體神經(jīng)干細胞移植入大鼠腦出血模型腦內后，實驗組大鼠神經(jīng)功能修復

5、與對照組相比，存在顯著差異( P < O ．0 5 ) ；7周后，實驗組大鼠腦內部分細胞B R D U ／G F A P ，B R D U ／N E U N 免疫組化雙標染色陽性。結論：①成年大鼠海馬齒狀回顆粒下區(qū)存在可以分離提取的成體神經(jīng)干細胞。②自體血紋狀體注入法能獲得較為穩(wěn)定的腦出血模型。⑧成體神經(jīng)下細胞移植入大鼠腦出血模型體內后能顯著促進大鼠神經(jīng)功能修復；7 周后，移植的細胞能在大鼠體內分化為表達神經(jīng)元及膠質細胞特異性標志