1、鴕鳥具有豐厚的經濟價值和寶貴的科研價值，近年來鴕鳥產業(yè)也在世界上逐漸壯大和發(fā)展。硼參與動物機體多種代謝活動，與生長性能和免疫功能密切相關。大量的研究報道，低劑量的硼對機體生長發(fā)育具有促進和營養(yǎng)作用，是動物所必需的一種微量元素，而高劑量的硼則具有一定的抑制甚至毒害作用。硼營養(yǎng)作用的發(fā)揮可能與硼的抗氧化作用相關。此外，腎組織作為硼重要的排泄器官和蓄積器官，更容易受到外界因素的刺激。因此，本試驗以90日齡雛鴕鳥腎組織作為試驗材料，通過硼酸的形

2、式分別在飲水中添加0，40，80，160，320和640 mg/L硼，分別采用HE、免疫組織化學、TUNEL技術、MDA、GSH-Px和T-AOC測定和實時熒光定量PCR方法，研究添加硼對雛鴕鳥腎抗氧化能力和Nrf2介導的抗氧化防御信號通路的影響，以此探明硼對雛鴕鳥腎抗氧化能力的作用機制。研究內容和結果如下:
　　1.硼對雛鴕鳥腎組織結構的影響
　　與對照組相比較，40、80 mg/L硼組腎組織結構更清晰，腎小管上皮細胞分界

3、更明顯;160 mg/L硼組腎組織除少數腎小球毛細血管輕微擴張，腎小管上皮細胞有輕微的脂肪變性外，未見明顯的組織結構改變;320、640 mg/L組腎小體結構模糊，腎小管不同程度的損傷，尤其是近端小管，此外，上皮細胞碎裂或消失，管腔內散布大量的組織碎片。
　　2.硼對雛鴕鳥腎組織細胞凋亡的影響
　　細胞凋亡貫穿細胞生長發(fā)育的整個過程，特別是受到外界刺激時，細胞凋亡更易發(fā)生。雛鴕鳥腎組織的HE染色切片結果顯示，添加160～64

4、0 mg/L硼組腎小管上皮細胞體積明顯縮小，細胞核碎裂和固縮，提示可能發(fā)生細胞凋亡。為了驗證此點，本試驗采用TUNEL技術結合IPP軟件進行研究和統(tǒng)計學分析。結果發(fā)現，與對照組相比，40，80 mg/L硼組凋亡細胞在雛鴕鳥的腎小球和腎間質以及腎小管均有分布，但凋亡細胞數量明顯減少，提示40，80 mg/L硼能夠顯著抑制雛鴕鳥腎組織細胞凋亡;160 mg/L硼組凋亡細胞數量稍微增加;320、640mg/L硼組雛鴕鳥腎組織凋亡細胞主要分布于

5、雛鴕鳥的腎小管上皮細胞中，而且凋亡細胞數量顯著增加，以640 mg/L硼組最為顯著，提示320、640 mg/L硼顯著促進雛鴕鳥腎組織發(fā)生細胞凋亡。
　　3.硼對雛鴕鳥腎組織抗氧化能力的影響
　　本試驗使用MDA、GSH-Px和T-AOC試劑盒分別測定雛鴕鳥腎組織MDA含量、GSH-Px和T-AOC酶活性。數據顯示:與對照組比較，飲水中添加40、80 mg/L硼（以80 mg/L硼最顯著），明顯提高雛鴕鳥腎組織GSH-Px和

6、T-AOC酶活性，降低MDA含量，進而提高雛鴕鳥腎組織的抗氧化能力;飲水中添加160 mg/L及以上硼（特別是640 mg/L硼），顯著降低雛鴕鳥腎組織T-AOC酶活性，同時顯著升高MDA含量，提示雛鴕鳥腎組織抗氧化能力降低，脂質過氧化反應增強，可能造成腎組織的氧化損傷。
　　4.硼對雛鴕鳥腎組織Nrf2信號通路的作用研究
　　Nrf2信號通路是機體抵抗氧化應激的關鍵保護通路，能夠維持機體細胞氧化還原反應的動態(tài)平衡，同時還具

7、有抑制細胞凋亡的作用。本研究利用熒光定量PCR技術檢測雛鴕鳥腎組織中Nrf2信號通路里的3個主要基因(Nrf2、HO-1和GCLc)的表達。結果顯示，添加40、80 mg/L硼3種基因的表達呈上升水平，且明顯高于對照組，提示40、80 mg/L硼可能提高抗氧化能力基線;添加320、640 mg/L硼Nrf2、HO-1和GCLc基因的表達水平逐漸下降，但與對照組相比，表達量仍然顯著升高，提示通過激活Nrf2信號通路，增加下游HO-1和GC

8、Lc抗氧化酶的表達，應對高硼產生的刺激損傷和細胞凋亡。
　　5.硼對雛鴕鳥腎組織Nrf2蛋白定位表達的研究
　　Nrf2是信號通路中的主控調節(jié)因子。本試驗采用免疫組織化學技術對Nrf2蛋白表達進行定位的研究。研究結果發(fā)現，40和80 mg/L硼組Nrf2蛋白顆粒主要分布雛鴕鳥腎小管中，以上皮細胞數目居多。當硼濃度超過160 mg/L，在多數雛鴕鳥腎小管上皮細胞以及個別的腎小球和腎間質中都有Nrf2棕黃顆粒的表達，分布以聚集態(tài)

9、居多，與對照組相比，蛋白表達量明顯增多。
　　綜合以上試驗結果，得出以下試驗結論:(1)低劑量硼(40、80 mg/L)能夠提高雛鴕鳥腎組織的抗氧化能力，抑制細胞凋亡，進而可能促進雛鴕鳥腎組織的發(fā)育具有作用，以80 mg/L營養(yǎng)效果最優(yōu);高劑量硼(320、640 mg/L)降低雛鴕鳥腎組織的抗氧化能力，增強脂質過氧化反應，促進細胞凋亡發(fā)生，對雛鴕鳥腎組織具有一定的損傷作用，以640 mg/L最為明顯。(2)硼對雛鴕鳥腎組織抗氧化能