1、菌斑生物膜是黏附于牙齒表面的微生物團體，是齲病發(fā)生的始動因子。 生物膜中細菌的基因表達和表型明顯不同于浮游細菌，對抗生素具有較強的抵抗力。變形鏈球菌是公認的致齲菌，變鏈素(mutacin)是由變形鏈球菌所產(chǎn)生的具有抑菌效果的細菌素。它有抑制與本菌不同株或不同型以及其它類型相近的細菌的生長，以維持其本身生存需要的作用，也是細菌在生存中的一個重要競爭手段。本實驗通過固相合成技術、抑菌實驗技術、動物實驗技術，人工合成了mutacinⅠ

2、、Ⅲ及組成它們的8 條短肽的一級結構，并對其進行抑菌活性檢測，為進一步的應用研究奠定了基礎。 1．MutacinⅠ、Ⅲ多肽及短肽的設計合成研究本實驗采用Fmoc固相多肽合成技術人工合成變形鏈球菌多肽Ⅰ、Ⅲ型mutacin及8條短肽。使用高效液相色譜儀分析提純，使用質譜法碎片結構分析技術，對合成產(chǎn)物進行檢測。結果表明，準確合成了Ⅰ型的全部24及Ⅲ型的全部22個氨基酸序列，準確純度達80％，即具有抑菌活性。經(jīng)質譜數(shù)據(jù)分析,峰值與初始

3、分子量的誤差< 2‰，說明多肽合成成功（短肽合成與鑒定技術同上）。成功合成變形鏈球菌Ⅰ、Ⅲ型mutacin多肽及短肽，為多肽防齲疫苗研究提供了基礎。 2．MutacinⅠ、Ⅲ及短肽的體外抑菌研究本實驗研究人工合成mutacinⅠ、Ⅲ及短肽對牙菌斑主要致齲菌的抑制作用，尋找其活性基團。采用二倍稀釋法檢測系列短肽對變形鏈球菌和血鏈球菌的最小抑菌濃度，并檢測其對變形鏈球菌、血鏈球菌、韋榮氏菌、粘性放線菌、內氏放線菌、遠緣鏈球菌的抑菌圈

4、直徑大小。結果顯示人工合成mutacinⅠ及Ⅲ及部分短肽類似物對變形鏈球菌、遠緣鏈球菌、血鏈球菌有抑菌活性。MutacinⅠ、Ⅲ對變形鏈球菌的最小抑菌濃度為50％，即濃度在0.5mmol/ml以上具有抑菌能力，而合成的短肽對于變形鏈球菌沒有抑制作用。 MutacinⅠ對血鏈球菌無抑菌效果，mutacinⅢ對血鏈球菌的最小抑菌濃度為50％，3號短肽與8號短肽對血鏈球菌的最小抑菌濃度為50％，其他短肽對血鏈球菌均無抑菌作用。根據(jù)其抑

5、菌活性，可初步確定其活性基團位置。 3．MutacinⅠ、Ⅲ中具有活性的短肽的體內抑菌實驗研究通過應用mutacinⅠ、Ⅲ中活性短肽，觀察大鼠口內的菌斑生長情況。 本實驗選用SD 大鼠，適應性喂養(yǎng)一周（接種鏈球菌）后，隨機分為4 組，定期涂擦實驗藥物。觀察4 組大鼠上頜磨牙在擦藥前和擦藥2 周后的菌斑面積變化，用Photoshop 軟件和VC++6.0 軟件做菌斑面積統(tǒng)計，最后用SPSS統(tǒng)計軟件檢驗。結果顯示活性短肽組大