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文檔簡(jiǎn)介
1、染色質(zhì)構(gòu)象捕獲技術(shù)讓人們認(rèn)識(shí)到,染色體在細(xì)胞核中的排布不是雜亂無(wú)章的,而是占據(jù)著細(xì)胞核的不同位置行使者自己的功能。各染色體間也存在著大量交互。許多實(shí)驗(yàn)都表明,基因組3D結(jié)構(gòu)對(duì)細(xì)胞功能的正常發(fā)揮具有重要的作用。
偽狂犬病毒的核酸為線性雙鏈DNA,在進(jìn)入細(xì)胞核后會(huì)迅速環(huán)化,進(jìn)行滾環(huán)復(fù)制。人們對(duì)其與宿主間相互作用的研究越來(lái)越深入,但是沒有精細(xì)研究它們的DNA在三維空間的相互作用。我們猜想PRV在進(jìn)入到細(xì)胞核后,會(huì)像宿主基因組的一部分
2、,在3D空間構(gòu)象上與宿主的基因進(jìn)行著交互。從而調(diào)控宿主的細(xì)胞功能以利于自己的生存。
本文采用染色質(zhì)構(gòu)象捕獲技術(shù),探索PRV的基因組和宿主的基因組之間的空間互作關(guān)系,得到如下結(jié)果:
1,通過(guò)對(duì)現(xiàn)有條件的摸索,我們將PRV感染的宿主細(xì)胞進(jìn)行了基因組互作文庫(kù)的構(gòu)建。通過(guò)電泳檢查以及測(cè)序分析,發(fā)現(xiàn)所得到的文庫(kù)和我們預(yù)期的一致,可以進(jìn)行下游的分析使用。
2,文庫(kù)構(gòu)建完成后,通過(guò)二代高通量測(cè)序以及生物信息學(xué)的分析,我們
3、發(fā)現(xiàn)PRV基因組和宿主的基因組存在著很強(qiáng)的交互作用,并且具有很強(qiáng)的實(shí)驗(yàn)重復(fù)性。這就說(shuō)明我們所得的結(jié)果不是由實(shí)驗(yàn)的隨機(jī)誤差所造成的,而是實(shí)際情況就是如此,即存在基因組間的交互現(xiàn)象。
3,通過(guò)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)這種基因組間的互作具有一定的生物學(xué)意義。在同一位點(diǎn)附近的和病毒基因組互作的基因,它們的上調(diào)或是下調(diào)的步調(diào)一致。這也和目前3D基因組研究的理論較為一致,即在同一個(gè)區(qū)域的基因一般同時(shí)被抑制或是激活。
4,另外
4、我們也發(fā)現(xiàn),在病毒核酸內(nèi)部也存在著一種空間結(jié)構(gòu)。病毒基因組上的片段與病毒其它位置的交互頻率是有差異的。有的位置和許多位置都存在較強(qiáng)的交互現(xiàn)象,說(shuō)明此位置在病毒的3D基因組內(nèi)和其它位置都靠得比較近,可能發(fā)揮著重要的作用。
本研究揭示出病毒與宿主在3D基因組層面的相互作用,為人們進(jìn)一步探索病毒和宿主相互作用打下一定的理論基礎(chǔ)。為以后病毒的防治提供一個(gè)新的角度,從阻斷病毒和宿主基因組間的相互作用來(lái)遏制病毒基因組整合,從而對(duì)潛伏的病毒
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