三種動物源隱孢子蟲種類的分子鑒定與亞型分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隱孢子蟲是一種具有重要醫(yī)學和獸醫(yī)學意義的原生動物寄生蟲,可感染包括人在內的絕大多數(shù)動物。野生動物和牛均是隱孢子蟲的重要儲存宿主,目前研究人員已在多種野生動物中發(fā)現(xiàn)了不同隱孢子蟲蟲種/亞型,且某些地區(qū)野生動物源與牛源隱孢子蟲存在交叉感染,甚至具人獸共患性。因此,為了探尋四川省某些野生動物源隱孢子蟲與牛源隱孢子蟲蟲種/亞型間的關系,進行了本研究。
  本試驗收集了2014年4月-2015年8月期間采自四川黑熊、藏酋猴、羚牛和獼猴養(yǎng)殖場

2、,成都、碧峰峽動物園,成都、雅安大熊貓繁育基地的圈養(yǎng)野生動物糞便樣品共計465份,采用飽和蔗糖漂浮和巢式PCR法對其中隱孢子蟲的感染情況進行了檢測和鑒定,同樣利用巢式PCR法鑒定本實驗室保存的四川地區(qū)牛源隱孢子蟲陽性糞便樣品53份;擴增GP60及MLST位點(MS1、MS2、MS3、MS16)基因鑒定隱孢子蟲亞型。并運用Structure分析了Cryptosporidium andersoni的種群結構,探索四川地區(qū)C.anderson

3、i的種群特征。
  糞便漂浮后鏡檢結果顯示野生動物感染隱孢子蟲為陰性。但巢式PCR檢測到了松鼠猴源、駱駝源隱孢子蟲(SCSM01、CDBC01)各1份。同時有48株牛源隱孢子蟲分離株(SC01-SC48)的18S rRNA基因位點成功擴增。
  結合18S rRNA基因位點序列同源性和種系發(fā)育分析判斷SCSM01為C.hominis,CDBC01為C.andersoni。而SC01-SC07、SC08-SC15、SC16-S

4、C29和SC30-SC48分別為C.parvum、C.ryanae、C.andersoni和C.bovis。四川地區(qū)的牛源隱孢子蟲的優(yōu)勢蟲種為C.bovis。且分離株SC20-SC29與CDBC01的18S rRNA基因位點無堿基的差異,而SC16-SC19與CDBC01僅在431位顯示一個堿基序列差異,四川省野生動物與牛隱孢子蟲可能存在交叉感染。
  SCSM01與SC01-SC07的GP60基因位點序列的種系發(fā)育表明,SCSM

5、01為新亞型,命名為IkA7G4;而SC01-SC07亞型為IIdA19G1。CDBC01和SC16-SC29的MS1、MS2、MS3和MS16四個微衛(wèi)星位點(MLST)的序列種系發(fā)育則表明,CDBC01的亞型為A6、A5、A2、A1,SC16-SC24亞型為A4、A4、A2、A1;SC25-SC28亞型為A4、A4、A4、A1;SC29亞型為A1、A4、A4、A1。將我國所有的C.andersoni亞型進行種群結構分析,共得到了3個族

6、群,各族群均有本試驗所得亞型,且優(yōu)勢亞型分布在第1族群,與第2族群中的亞型相比具有一定的區(qū)域特異性。
  綜上所述,本試驗首次在四川地區(qū)檢測到了松鼠猴感染隱孢子蟲,彌補了松鼠猴感染了隱孢子蟲的空白,豐富了關于非人靈長類的宿主范圍,鑒定出的IkA7G4填充了C.hominis的亞型數(shù)據(jù)庫。再次鑒定出駱駝源C.andersoni預示著C.andersoni可能為四川省感染駱駝的優(yōu)勢蟲種。同時鑒定出四川地區(qū)牛與駱駝均可感染C.ander

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