1、研究背景：
　　 上世紀(jì)六、七十年代,國(guó)內(nèi)外對(duì)各種類型惡性血液疾病及基因遺傳性疾病如重型地中海貧血(maior thalassemia)展開(kāi)了根治性治療--異基因骨髓移植(allogenic bone marrow transplantation,ALLo-BMT)的研究。隨著科學(xué)不斷進(jìn)步,骨髓移植技術(shù)越來(lái)越成熟,造血干細(xì)胞移植(hematopoietic stem celltransplantation,HSCT)的臨床應(yīng)用也

2、越來(lái)越廣泛,因此,對(duì)供者的需求量也越來(lái)越大,其中不乏兒童供者,并逐漸趨向低齡化。目前,對(duì)基因遺傳性疾病一一重型地貧來(lái)說(shuō),首選同胞供者,這勢(shì)必會(huì)導(dǎo)致供者年齡偏小。對(duì)于大齡兒章及成人供者采集造血干細(xì)胞的安全性及對(duì)身體健康影響的研究已較多,一致認(rèn)為采集造血干細(xì)胞安全性良好,并且對(duì)身體健康影響甚微。但是,對(duì)于低齡兒童供髓,尤其是幼兒采集骨髓后對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育的影響的相關(guān)研究甚少。目前,由于外周血造血干細(xì)胞采集術(shù)(peripheral blood st

3、em cell collection,PBSCC)因其采集優(yōu)勢(shì)得到很大發(fā)展,有逐漸取代骨髓采集術(shù)的趨勢(shì)。但是,PBSCC在小兒臨床應(yīng)用方面有一定的難度,童年齡小,配合性差,靜脈血管細(xì),血容量低等特點(diǎn),外周血不易采集到足量的造血干細(xì)胞(hematopeietic stem cell,HSC)。分離初期易因血容量驟降而引起低血壓,及抗凝劑所致的低鈣血癥等癥狀。血細(xì)胞分離機(jī)多應(yīng)用于7歲以上的供者,3歲以下供者使用血細(xì)胞分離機(jī)取得干細(xì)胞的技術(shù)尚

4、未普遍開(kāi)展。但是目前有部分患者,因病種、病情、HLA匹配等因素的限制,需要幼兒提供HSC。骨髓采集術(shù)成為幼兒提供HSC的重要方法。捐獻(xiàn)造血干細(xì)胞是一個(gè)系統(tǒng)的過(guò)程,供者一般需要在采集前接受重組人粒細(xì)胞集落刺激因子(recombinant human granu-locyte colony stim-mulat-ing factor,rhG-CSF)動(dòng)員干細(xì)胞。低齡兒童因體重輕,骨髓采集量受限制,更需要接受rhG-CSF預(yù)處理；另外,因?yàn)榕?/p>

5、合性差,需要在全麻下行采集術(shù),兩者均會(huì)增加HSC采集的風(fēng)險(xiǎn)。家長(zhǎng)對(duì)采集骨髓仍存在多種疑慮,尤其是對(duì)骨髓捐獻(xiàn)后,是否影響年齡較小供者的生長(zhǎng)發(fā)育甚為關(guān)注。
　　 研究目的：
　　 通過(guò)觀察3歲以內(nèi)小供者住院期間接受rhG-CSF預(yù)處理的臨床反應(yīng)、動(dòng)員效果,骨髓采集術(shù)的即時(shí)影響及術(shù)后供者體重、身高的變化,為幼兒采集骨髓的即時(shí)臨床安全性和對(duì)其生長(zhǎng)發(fā)育的影響提供參考,從而為不宜使用PBSC采集術(shù)的兒童尋找安全有效的提供HSC的方法

6、。
　　 方法
　　 入選南方醫(yī)院兒科移植中心2007年8月～2009年9月20例小于3歲的供髓者(最小年齡12月,最大年齡36月,均齡24個(gè)月)；體重均數(shù)為11.25Kg(最輕8.5Kg,最重13.5Kg)。20例小供者入院前均接受常規(guī)身體檢查,包括血常規(guī)、血型、肝功能、腎功能、心肌酶譜、胸片、心臟彩超、心電圖、出凝血時(shí)間及病毒學(xué)方面檢查。確保供者無(wú)供髓禁忌癥。
　　 供者一般在骨髓采集術(shù)前5天入院,皮下注射r

7、hG-CSF,10ug/Kg/d,每天一次,連用5天。觀察患者精神情況、睡眠時(shí)間、有無(wú)發(fā)熱、惡心嘔吐、食欲減退、煩躁,疼痛、疲勞或其他如過(guò)敏、心律失常等情況。隔天監(jiān)測(cè)血常規(guī)。在刺激因子應(yīng)用第5劑后即骨髓采集術(shù)前,檢測(cè)外周血五分類。
　　 骨髓采集術(shù)在本院手術(shù)室,全身麻醉的情況下進(jìn)行。術(shù)前由麻醉醫(yī)師評(píng)估麻醉風(fēng)險(xiǎn),兒科醫(yī)師為采集骨髓者。術(shù)中嚴(yán)密監(jiān)測(cè)生命體征,并保持供者液體出入平衡,即依據(jù)骨髓采集量,予以相似量經(jīng)25Gy射線照射的紅細(xì)

8、胞懸液及新鮮冰凍血漿或代血漿輸注。
　　 術(shù)后常規(guī)予以-劑抗生素預(yù)防感染。術(shù)后次日均測(cè)心肌酶譜及血常規(guī)。血紅蛋白大于95g/L,心肌酶譜基本正常,患兒無(wú)異常情況時(shí)準(zhǔn)許出院觀察。骨髓采集術(shù)后1月復(fù)查血常規(guī)。分別在出院后1月、3月及6月以問(wèn)卷形式電話隨訪調(diào)查供者生活情況。
　　 結(jié)果
　　 1.rhG-CSF預(yù)處理后的臨床反應(yīng)觀察
　　 20例供者在接受rhG-CSF處理的5天內(nèi)均未發(fā)生過(guò)敏、心率失常、骨痛等

9、藥物不良反應(yīng),其中1例出現(xiàn)疲勞、睡眠差(5％),1例食欲減退(5％),2例(10％)出現(xiàn)中度發(fā)熱。20例供者在rhG-CSF使用過(guò)程中未發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng),小供者完全可以耐受rhG-CSF(10ug/Kg/d)的動(dòng)員作用。
　　 2.經(jīng)rhG-CSF動(dòng)員后外周血細(xì)胞與骨髓采集物中干細(xì)胞的相關(guān)性比較
　　 rhG-CSF動(dòng)員的20名供者骨髓采集當(dāng)天外周血單核細(xì)胞量(monocyte,MONO)為3.743±2.205×109

10、/L；每微升骨髓采集物中(bone marrow collection,C-BM)CD34+細(xì)胞數(shù)(276.5±125.83)個(gè),C-BM中CD34+總量(117.222±62.930)×106個(gè)。
　　 骨髓采集當(dāng)天每微升外周血循環(huán)中的單核細(xì)胞數(shù)量與每微升骨髓采集物中CD34+細(xì)胞的量、CD34+細(xì)胞總量呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.506,P<0.01；r=0.620,P<0.01)；骨髓采集當(dāng)天的外周血白細(xì)胞數(shù)(white blo

11、od cell,WBC)為43.063±7.358×109/L,與每微升骨髓采集物中CD34+細(xì)胞的量(r=0.06,P>0.05)、CD34+細(xì)胞總量(r=0.039,P>0.05)不相關(guān)；骨髓采集當(dāng)天的外周血淋巴細(xì)胞數(shù)量為5.56±1.478×109/L,與每微升C-BM中CD34+細(xì)胞的量(r=0.391,P>0.05)不相關(guān)；與C-BM中CD34+細(xì)胞總量(r=0.249,P>0.05)不相關(guān)；
　　 3.骨髓采集術(shù)中及

12、出院前供者相關(guān)情況分析
　　 骨髓采集術(shù)中20例患者均未發(fā)生麻醉相關(guān)意外事件,術(shù)中5例患者出現(xiàn)竇性心動(dòng)過(guò)速(25％),術(shù)后2例出現(xiàn)竇性心率不齊(10％)；術(shù)后24小時(shí)未發(fā)生頭痛、嘔吐現(xiàn)象:術(shù)后復(fù)查血常規(guī)血紅蛋白(Hb)(115.05±13.09)g/L較入院時(shí)Hb(124.55±15.37)g/L無(wú)顯著差異(P>0.05)。骨髓采集量(431.8±108.39)ml與術(shù)后Hb含量不相關(guān)(r=0.04,P>0.05)。平均術(shù)后住院

13、天數(shù)36(12～120)h。骨髓采集量為(39.28±9.196)ml/Kg；術(shù)后心肌酶(CK-MB)較入院前無(wú)顯著差異(P>0.05)。
　　 4、骨髓采集術(shù)后隨訪
　　 術(shù)后1月隨訪白細(xì)胞及血紅蛋白與入院前相比無(wú)顯著差異(P>0.05)；分別于出院1月、3月及6月觀察所有供者的體重與身高。90％的供者都在2006年WHO公布的0～5歲同齡兒童生長(zhǎng)標(biāo)準(zhǔn)的(x)-2SD以上。術(shù)后6月50％以上供者身高和體重在(x)+1S

14、D以上。
　　 結(jié)論
　　 1.rhG-CSF可以顯著動(dòng)員小供者體內(nèi)造血干細(xì)胞增殖分化。
　　 2.rhG-CSF動(dòng)員的健康幼兒(0～3歲)供者骨髓采集當(dāng)天外周血循環(huán)中單核細(xì)胞數(shù)量是一項(xiàng)預(yù)測(cè)C-BM中CD34+細(xì)胞數(shù)量的簡(jiǎn)易、可行的指標(biāo)。
　　 3.rhG-CSF對(duì)低齡供者無(wú)明顯的短期副作用。幼兒可以耐受10ug/kg/d的劑量。
　　 4.低齡兒童可以耐受短時(shí)間內(nèi)采集大量骨髓的手術(shù),而且不會(huì)出現(xiàn)