1、高原性肺動脈高壓是指正常人移居高原后由于低壓低氧，引起肺小動脈功能及器質性改變致使肺動脈壓力增高。早期高原性肺動脈高壓系因急性低壓低氧引起的肺小動脈收縮；長期慢性低壓低氧則引起肺血管及心室肌重構，最終發(fā)展為難治性梗阻性肺動脈高壓。低壓低氧是高原性肺動脈高壓(HAEPH)產生的根本原因。迄今為止，慢性HAEPH的機制尚未完全闡明，而且仍缺乏理想的治療方法。因此，對慢性HAEPH的發(fā)病機制及治療措施的研究已成為國內外醫(yī)學研究的熱點之一。

2、r>　　波生坦(bosentan)是一種相對分子質量低的特異性競爭性的雙重內皮素(ET)受體阻滯劑，由加拿大Acetlion公司和美國GenentetchInc公司聯(lián)合開發(fā)，商品名為Tracleer(全可利)。目前主要用于治療原發(fā)性肺動脈高壓和硬皮病相關性肺動脈高壓。但是，波生坦是否可以逆轉長期低壓低氧引起的肺動脈高壓，從而達到治療高原性肺動脈高壓的目的，目前尚缺乏相關報道。
　　5-羥色胺(serotonin，5-HT)是肺內的

3、一種縮血管因子，具有促血管平滑肌細胞收縮和增殖的作用。5-HT與5-HT1B受體(serotonin receptor 1B，5-HT1B)結合增加血管平滑肌細胞內磷酸二酯酶(phosphodiesterase，PDE)的活性從而導致環(huán)磷酸腺苷(cAMP)水平下降，引起肺動脈收縮。5-HT可以通過5-羥色胺轉運體(serotonin transporter，5-HTT)和/或5-HT1B受體促使肺動脈平滑肌細胞增殖和肥大，引起肺血管重塑

4、。研究已證實：5-HTT和5-HT1B受體均參與了原發(fā)性肺動脈高壓和常壓低氧性肺動脈高壓的形成。但是，5-HT、5-HTT和5-HT1B受體在慢性HAEPH形成中的變化以及波生坦對它們的影響卻鮮有報道。
　　因此，本課題擬從整體、器官、分子三個層次初步探討了：(1)波生坦對慢性HAEPH的治療作用及其機制；(2)慢性HAEPH大鼠體內5-HT、5-HTT和5-HT1B受體的變化，以及波生坦對其變化的影響。
　　一、波生坦降低

5、了慢性HAEPH
　　1．方法
　　(1)采用動物低壓低氧艙模擬海拔5000～5500米高度氣壓環(huán)境(大氣壓約50kPa)，建立慢性HAEPH的大鼠模型。健康SD大鼠隨機分為6組(每組10只)：正常組，模型3周組，模型4周組，模型6周組，安慰劑組和波生坦組。除正常組外，其余各組置于自制低壓低氧艙進行間斷性低氧，每天8h。模型3周組大鼠、模型4周組大鼠分別于低壓低氧艙中飼養(yǎng)3周和4周，模型6周組、安慰劑組和波生坦組大鼠在低壓低

6、氧艙中飼養(yǎng)6周。自第4周起，在低壓低氧前，分別給予安慰劑組大鼠和波生坦組大鼠生理鹽水2ml或波生坦(bosentan)100mg?kg-1?d-1灌胃。
　　(2)用微導管自右頸外靜脈插管至右心室及肺動脈，測定平均肺動脈壓(mPAP)及右心室收縮期終末壓力(RVSP)等肺血流動力學指標。同時放置導聯(lián)電極記錄和監(jiān)測大鼠心電圖(ECG)和心率(HR)等指標。
　　(3)稱量大鼠右心室(RV)和左心室(LV)加室間隔(S)重量，以

7、RV/(LV+S)比值反映右心室肥厚程度。稱量大鼠全肺重量(PM)和體重(BM)，以PM/BM比值反映肺水腫程度。
　　(4)光鏡下觀察肺小動脈形態(tài)學變化，并用圖像分析儀測量與呼吸性細支氣管及肺泡管伴行的肺小動脈的外徑(ED)、動脈中層壁厚(WT)，然后計算血管壁中層厚度占血管外徑的百分比(WT％)，以反映肺血管重建程度。光鏡下觀察非肌性肺小動脈(直徑40～60μm)管壁雙層彈力膜的完整性，計算非肌性肺小動脈的肌化程度，反映肺動脈

8、的肌化程度。
　　(5)分別用硝酸還原酶法和放射免疫分析法檢測大鼠血液及肺組織NO和ET-1的水平。
　　(6)用化學比色法測定大鼠肺組織中結構性一氧化氮合酶(constitutiveNOS，cNOS)和總一氧化氮合酶(NOS)的活性。
　　2．結果
　　(1)大鼠低壓低氧3周后己形成肺動脈高壓(PAH)。模型3周組大鼠的mPAP及RVSP明顯升高，WT％、RV/(LV+S)比值、PM/BM比值以及肺小動脈肌化度

9、均顯著增加。光鏡下觀察，肺小動脈管壁增厚，管腔縮小，發(fā)生肌化的肺小動脈數量明顯增多。上述指標隨低壓低氧時間的延長而加重，至6周時更為顯著。但各組大鼠HR無明顯變化。
　　(2)低壓低氧6周后，安慰劑組大鼠的mPAP和RVSP水平均顯著高于正常組。而波生坦組大鼠的mPAP和RVSP水平均顯著降低，和正常組大鼠相比已沒有顯著差異。
　　(3)波生坦組大鼠的肺血管重建指標WT％和肺小動脈肌化度均恢復至正常大鼠水平，其右心室肥厚指標

10、RV/(LV+S)比值、肺水腫指標PM/BM比值和安慰劑組大鼠相比均顯著降低。
　　(4)低壓低氧6周后，安慰劑組大鼠血液和肺組織中NO水平明顯降低，而ET-1的水平顯著增高。與安慰劑組大鼠相比，波生坦組大鼠血液和肺組織中NO的水平均明顯升高。雖然波生坦組大鼠血漿中ET-1的水平高于安慰劑組，但其肺組織中ET-1的水平已經顯著下降。
　　(5)安慰劑組大鼠肺組織中cNOS和總NOS的活性明顯降低。與安慰劑組相比，波生坦組大鼠

11、肺組織中cNOS和總NOS的活性顯著升高，其值和正常組相比沒有顯著差異。
　　3．結論
　　(1)波生坦不僅顯著降低了慢性HAEPH大鼠的mPAP、RVSP，減輕了右心室肥厚和肺水腫，而且成功逆轉了肺血管重構。提示：波生坦對慢性HAEPH有明確的治療作用。
　　(2)波生坦可以降低慢性HAEPH大鼠肺組織中ET-1的含量，增加cNOS和總NOS的活性，從而使大鼠循環(huán)和肺組織中NO的含量升高。這可能是波生坦治療慢性HAE

12、PH的機制之一。
　　二、波生坦對慢性HAEPH大鼠體內5-HT水平及其肺動脈中5-HTT和5-HT1B受體表達的影響
　　1．方法
　　(1)30只健康SD大鼠隨機分為3組(每組10只)：正常組、安慰劑組和波生坦組。正常組于常壓環(huán)境中飼養(yǎng)，其余兩組置于低壓低氧艙進行間斷性低氧，每天8h。自第4周起，在低壓低氧前，分別給予安慰劑組大鼠和波生坦組大鼠生理鹽水2ml或波生坦(bosentan)100mg·kg-1·d-1灌

13、胃。
　　(2)酶聯(lián)免疫吸附實驗法(ELASA)檢測大鼠的無血小板血漿和肺組織中5-HT的水平。
　　(3)免疫組織化學和Westernblot法觀察大鼠肺動脈和肺組織中5-HTT、5-HT1B受體的表達變化。
　　2．結果
　　(1)和正常大鼠相比，安慰劑組大鼠無血小板血漿和肺組織中5-HT的水平均顯著升高。波生坦灌胃3周后，慢性HAEPH大鼠的血漿和肺組織中5-HT的水平均顯著降低。
　　(2)免疫組織

14、化學和Westernbolt結果顯示：和正常組大鼠相比，安慰劑組大鼠肺動脈和肺組織中5-HTT、5-HT1B受體的表達顯著增多。而波生坦組大鼠肺動脈和肺組織中5-HTT、5-HT1B受體的表達均低于安慰劑組。
　　3．結論
　　(1)低壓低氧不僅引起了大鼠體內5-HT水平的升高而且促使大鼠肺動脈管壁中5-HTT和5-HT1B受體的過度表達。這證實了5-HT系統(tǒng)的激活參與了慢性HAEPH的形成。
　　(2)波生坦既能有效