1、微生物檢測是確保藥品質量安全、減少臨床不良反應發(fā)生的重要手段，也是尋求高效抗菌藥物、解決細菌耐藥問題的快捷方式。然而，受之藥典常規(guī)檢測方法周期長、靈敏度低、主觀性強等局限，現(xiàn)代分析技術價格昂貴、操作復雜、不具特征專屬性等不足，探索一種快速、靈敏兼具特異性的微生物檢測方法成為必然。
　　本課題依據(jù)微生物生長過程中普遍存在的能量代謝現(xiàn)象，建立了基于生物熱動力學的微生物檢測新方法，利用16SrDNA、MALDI-TOF MS、VITEK

2、-2 compact技術對其鑒定能力加以佐證。同時，為實現(xiàn)新建方法的推廣應用，開展了臨床驗證、注射劑無菌檢測、藥物抑菌活性評價試驗，以考察該方法的實用價值。結果表明基于生物熱動力學的微生物檢測方法不僅具有快速、靈敏、初步溯源的微生物檢查效力，還可實時在線、準確定量表征藥物對微生物代謝的干預過程，具有重要的應用價值和探討意義。主要研究結果如下：
　　1）建立一種快速靈敏、實時在線兼具生物活性指紋譜的微生物檢查新方法
　　依據(jù)微

3、生物生長代謝過程中存在熱量變化的普遍現(xiàn)象，采用生物熱動力學法，以微生物生長速率k≥0及熱功率差值Pi-P0大于3倍基線噪音為評價指標，檢測其熱量變化規(guī)律以考察新建方法對微生物及實際樣本的檢測效力。結果顯示，新建方法可在10 h內檢出規(guī)定的革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和真菌，且靈敏度均小于100 CFU·mL-1；同時發(fā)現(xiàn)不同稀釋度的同一種微生物具有基本一致的熱譜曲線峰形，且具有明顯的指紋特征。新建方法較常規(guī)無菌檢查方法具有更高的靈敏度、更

4、短的檢測時間與潛在的指紋溯源特征。
　　2）基于生物熱動力學的微生物檢測新方法應用
　　臨床微生物污染樣本的熱譜圖與標準菌株的熱譜圖相似度極高，且不同微生物具有不依賴濃度變化而改變的指紋溯源特征存在，具有早期篩查微生物污染源的潛在價值。
　　在不同滅菌處理的注射劑實際樣本（復方茵陳注射液、注射用雙黃連粉針、復方曲安奈德混懸型注射液）無菌檢測中，未滅菌樣品及滅菌不徹底樣品均可在10 h內檢出，未滅菌樣品檢出時間低于滅菌不

5、徹底樣品，提示其污染程度較高。結果表明，新建方法對注射劑實際樣本無菌檢查具有良好的靈敏性與適用性。
　　采用生物熱動力學微生物檢測技術，考察黃連堿、小檗堿及其與亞胺培南西司他丁鈉聯(lián)合用藥對多重耐藥鮑曼不動桿菌的抑菌活性。通過所獲得的生物熱活性譜提取微生物的生長速率、傳代時間、出峰時間、最大發(fā)熱功率等參數(shù)，定量監(jiān)測藥物抑菌活性。結果顯示：黃連堿（Cop）的抑菌活性稍高于小檗堿（Ber），且兩者與抗生素亞胺培南西司他丁鈉之間都存在很好