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文檔簡介
1、[目的]
1.通過皮內注射P物質(SP)建立BALB/c小鼠急性瘙癢模型。
2.觀察Spantide(NK1受體拮抗劑)、L-精氨酸(L-arg,NO供體)、L-NAME(總NOS抑制劑)、氨基胍(iNOS抑制劑)對SP誘導小鼠搔抓反應的影響,探討一氧化氮(NO)在SP誘導的BALB/c小鼠搔抓反應中的作用。
[方法]
1.BALB/c小鼠急性瘙癢模型的建立:對照組、實驗組分別在頸
2、背部皮下、皮內注射生理鹽水和不同劑量SP(20、40、80、160 nmol/site)50μl,注射后在無人條件下拍攝小鼠搔抓行為1 h,回放錄像計數小鼠后爪對注射部位的搔抓次數。
2.同時注射Spantide、L-arg或NOS抑制劑對SP誘導小鼠搔抓反應的影響:頸背部同時皮內注射SP(80 nmol/site)和生理鹽水、Spantide(0.5 nmol/site)、L-arg(300 nmol/site)、L-N
3、AME(100 nmol/site)、氨基胍(50 mg/kg),注射總體積均為50μl。
3.提前注射Spantide、L-arg或NOS抑制劑對SP誘導小鼠搔抓反應的影響:頸背部皮內注射生理鹽水(模型組)、Spantide(0.5 nmol/site,Spantide組)、L-arg(300 nmol/site,L-arg1組)、L-NAME(100 nmol/site,L-NAME組)、氨基胍(50 nmol/sit
4、e,氨基胍組),10 min后皮內注射SP(80 nmol/site);L-arg2組在頸背部皮內注射L-arg(300 nmol/site)后5 min,皮內注射SP(80 nmol/site)。第二次注射時旁開0.5cm,注射總體積均為40μl。
4.注射部位皮膚中皮膚中NO含量及iNOS表達測定:頸背部皮內注射Spantide(0.5 nmol/site)、L-arg(300 nmol/site)、L-NAME(10
5、0 nmol/site)、氨基胍(50 nmol/site),10 min后皮內注射SP(80 nmol/site)。注射SP后5 min處死小鼠,剪下注射處皮膚,分別用硝酸還原酶法檢測組織中NO含量、S-P法行免疫組織化學染色,染色結果用圖像分析軟件進行處理。
[結果]
1.皮下注射生理鹽水和不同劑量SP引起的小鼠搔抓次數差異無統計學意義(P>0.05)。除生理鹽水和20 nmol/site SP組之外,皮
6、內注射40~160 nmol/site SP可使小鼠出現劑量依賴性搔抓反應(P<0.01-0.05);這種搔抓反應在注射SP后5~10 min達到高峰,30~40 min后基本消退。
2.同時皮內注射Spantide、L-NAME對SP誘導的搔抓反應無明顯影響(P>0.05),而提前10 min注射Spantide、L-NAME可明顯減少小鼠搔抓次數(P<0.01);同時或提前10 min、5 min注射L-arg對SP誘
7、導的小鼠搔抓均無明顯影響(P>0.05);同時注射大劑量氨基胍(10 mg/kg)可增強SP誘導的小鼠搔抓反應(P<0.01),而提前10 min注射小劑量氨基胍(50 nmol/site)可明顯減少小鼠搔抓次數(P<0.05)。
3.Spantide組、L-NAME組、氨基胍組小鼠皮膚中iNOS表達和NO含量明顯低于SP組(P<0.01-0.05),但其在L-arg組中無明顯升高(P>0.05)。
[結論]
8、
1.皮內注射40~160 nmol/site SP可使BALB/c小鼠出現劑量依賴性搔抓反應,而皮下注射SP不能引起明顯的搔抓反應。
2.SP可通過激活皮膚中NK1受體來上調iNOS表達和促進NO合成,從而引起小鼠搔抓。
3.L-arg對SP誘導的BALB/c小鼠搔抓反應無明顯影響。
4.NOS抑制劑(L-NAME、氨基胍)可通過下調iNOS表達來減少皮膚中NO含量,從而抑制SP
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