1、肺癌是全世界發(fā)病率最高的惡性腫瘤，已成為人類癌癥死亡主要原因。非小細胞肺癌(NSCLC)占肺癌新發(fā)病例的75-80％，雖然各種治療手段不斷改善但其預后依然很差。侵襲和轉移是肺癌重要的生物學特征和影響生存率的主要因素。因此需要敏感而特異的指標來預測患者病變的侵襲、轉移性，指導患者接受更恰當?shù)姆暖?、化療措施并預示腫瘤發(fā)生復發(fā)或轉移的可能性。 肝素酶是一種葡萄糖苷內切酶，它能夠裂解細胞基底膜和細胞外基質中的硫酸乙酰肝素蛋白多糖核心分子

2、上的硫酸肝素，破壞細胞外基質和基底膜結構的完整性，直接促進腫瘤細胞的浸潤及轉移；肝素酶還可激活并釋放結合在乙酰肝素上的生長因子如堿性成纖維細胞生長因子和血管內皮細胞生長因子，間接誘導腫瘤血管生成，促進腫瘤生長。文獻報道在多種惡性腫瘤中肝素酶的表達與腫瘤細胞的轉移潛能和患者的不良預后密切相關，因此研究肝素酶與肺癌的關系可能有一定臨床指導意義，但現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)肝素酶的表達在不同的惡性腫瘤中生物學作用并不一致，而針對NSCLC中肝素酶的表達及其

3、生物學作用的研究甚少，因此我們擬針對肝素酶在非小細胞肺癌的表達及對其侵襲、轉移潛能的影響進行研究。 目的：檢測NSCLC腫瘤及癌旁肺組織肝素酶轉錄和翻譯水平的表達，并探討其與臨床病理特征的關系；構建人正、反義肝素酶基因真核表達載體，分別轉染低、高轉移潛能肺癌細胞，從正反兩方面驗證肝素酶對肺癌細胞侵襲、轉移潛能的影響。 方法：標本來源于48例確診為NSCLC的患者，應用免疫組化法檢測癌組織和癌旁肺組織的肝素酶、VEGF的表

4、達，CD34染色進行計數(shù)微血管密度(MVD)，應用RT-PCR和Westernblot技術檢測肝素酶mRNA和蛋白的表達。采用基因重組技術，構建肝素酶基因正、反義真核表達載體，并用脂質體法將正義真核表達載體轉入克隆化人低轉移肺癌細胞95C、反義真核表達載體轉入高轉移肺癌細胞95D。半定量RT-PCR和Westernblot檢測轉染前后肝素酶轉錄和翻譯水平表達的變化；應用MTT、克隆形成技術檢測細胞的增殖能力變化；流式細胞儀檢測細胞周期的

5、改變；改良Boyden小室法檢測體外細胞侵襲力的變化；裸鼠移植瘤模型觀察轉染前后肺癌細胞腫瘤形成能力和轉移潛能的改變。 結果：NSCLC癌組織中肝素酶的轉錄和翻譯水平表達明顯高于癌旁肺組織，并且與組織學類型、淋巴結轉移、血管浸潤、TNM臨床分期和腫瘤分化程度有密切相關(P＜0.05)，而與患者的年齡、性別和腫瘤大小無關(P＞0.05)；肝素酶的表達水平與VEGF表達(P＜0.05)和MVD(P＜0.01)密切相關；轉染反義肝素酶

6、基因后95D細胞增殖、侵襲力和腫瘤形成能力明顯受到抑制；而95C細胞轉染正義基因后細胞增殖、侵襲力和腫瘤形成能力得到明顯提升，從反面證明抑制肝素酶表達可抑制腫瘤形成和轉移潛能。 結論： 1.肝素酶表達水平可能是影響NSCLC患者預后的重要因素之一，肝素酶可能參與了NSCLC的發(fā)生、發(fā)展和轉移過程； 2.肝素酶的表達水平與VEGF的表達和MVD密切相關，提示肝素酶在NSCLC的腫瘤血管形成中發(fā)揮重要作用；