1、目的：
　　 為提高臨床實驗室造血干細胞計數(shù)結果的準確性和可比性，實驗室需要開展室內質量控制，并參加室間質量評價活動。這些質量保證措施的實施均需要使用合格的造血干細胞計數(shù)全血質控物，但是目前國內尚無機構生產(chǎn)此類質控物，只能依靠國外生產(chǎn)商（如美國BeckmanCoulter公司、美國BD公司等）生產(chǎn)的質控物。由于進口全血質控物價格昂貴，有效期短，入關手續(xù)繁瑣，適用性欠佳等原因，限制了室內質量控制和室間質量評價活動的開展。為推動質量

2、保證措施的實施，衛(wèi)生部臨床檢驗中心參考了大量國內外文獻及專利，以新鮮人臍帶血為原材料，研制了造血干細胞計數(shù)全血質控物，并對質控物的均勻性、穩(wěn)定性及適用性等性能進行了評價。
　　 方法
　　 1．質控物的研制：通過實驗對造血干細胞計數(shù)全血質控物制備過程中的影響因素進行研究，從而篩選質控物原材料，并優(yōu)化制備方案。
　　 (1)通過實驗對原材料自身穩(wěn)定性進行觀察，確定原材料篩選范圍及處理時限，并調查獲得可用于制備質控物

3、的原材料的可行性。
　　 (2)選用14種的分離條件分離新鮮臍帶血中的不同成分，并通過對分離條件的優(yōu)化，提高分離方法的回收效率。
　　 (3)選用4種固定液對新鮮臍帶血進行固定，并通過對固定液濃度的優(yōu)化，改善固定效果。
　　 (4)根據(jù)上述實驗結果，確定了最佳制備方案，進而制備了20111101和20111110兩個批號的造血干細胞計數(shù)全血質控物，每批質控物各200支。
　　 2．質控物的評價
　　

4、 (1)對紅細胞裂解性能和白細胞散射特性進行了評價。
　　 2)依據(jù)CNAS-GL03《能力驗證樣品均勻性和穩(wěn)定性評價指南》及ISOGuide35《標準物質/標準樣品的定值—通用原則和統(tǒng)計原理》的要求，對自制質控物CD34+細胞百分比指標的均勻性、穩(wěn)定性進行評價，同時檢測進口質控物作為對照。
　　 (3)選擇2種主流機型流式細胞儀各4家實驗室對自制質控物的適用性進行評價。
　　 (4)將自制質控物試用于Cou

5、lter-EPICSXL機型流式細胞儀室內質量控制。
　　 結果
　　 1．選用由北京市臍血庫提供的新鮮臍帶血做為質控物制備原材料。
　　 2．選用2號濃度的B固定液制備質控物。
　　 3．自制質控物的紅細胞裂解性能評價結果顯示，兩個批號的質控物分別用兩種常用溶血劑溶血后，流式上樣管底無肉眼可見的紅色沉積物；流式細胞儀白細胞散射圖顯示有核細胞分群清晰良好，無紅細胞及細胞碎片干擾，白細胞散射特性保持完好。<

6、br>　　 4．自制質控物均勻性評價結果顯示，質控物樣品內和樣品間差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)；20111101、20111110批號質控物CD34+細胞百分比指標均勻性評價結果的變異系數(shù)(CV)分別為5.40％和6.12%；不確定度分別為0.004%和0.003%;20111208、20111222新鮮標本重復性測量的不確定度為0.010%和0.008%。
　　 5．自制質控物穩(wěn)定性評價結果顯示，20111101、201

7、11110批號質控物及進口質控物CD34+細胞百分比指標，8周內檢測結果無線性趨勢變化(P值均大于0.05);20111101,20111110批號質控物和進口質控物8周內CD34+細胞百分比指標的百分偏差范圍分別為-1.04%～5.05%、-1.35%～2.47%和-2.26%～1.50%;不確定度分別為0.023%、0.015%和0.012%。
　　 6．自制質控物在兩種型號流式細胞儀上進行檢測，白細胞分群清晰，CD34+細

8、胞群與陰性細胞群分離明顯。FS-1批號質控物CD34+細胞百分比指標在BD-FACSCalibur、Coulter-EPICSXL機型儀器間檢測結果的變異范圍分別為5.73%和4.53。FS-2批號質控物在BD-FACSCalibur、Coulter-EPICSXL機型儀器間檢測結果的變異范圍分別為6.72%和3.50%。
　　 7．室內質量控制試應用結果顯示，20111101、20111110批號質控物和進口質控物在56天內的

9、10次檢測結果的CV分別為2.02%，1.24%和0.94%。
　　 結論：
　　 新鮮臍帶血12小時內可保持穩(wěn)定，且易采集，血量較大，故選用由北京市臍血庫提供的可用于科學研究的新鮮臍帶血作為質控物制備原材料。因新鮮臍帶血制備的全血質控物與臨床接收標本成分相似，所以能更好地模擬臨床標本，評價實驗室日常計數(shù)造血干細胞的能力。
　　 自制質控物的紅細胞裂解性能良好，白細胞散射特性可保持完好，有核細胞分群清晰；均勻性評

10、價結果良好，可認為自制質控物是均一的；穩(wěn)定性評價結果顯示自制質控物8周內可保持穩(wěn)定，性能與進口質控物穩(wěn)定性相似；使用BD-FACSCalibur、Coulter-EPICSXL機型各4臺流式細胞儀檢測自制質控物，檢測結果組內CV小于10%，組間CV小于10%，圖形結果白細胞分群清晰無交叉，CD34陽性細胞與陰性細胞群分離明顯，適用性評價良好，可認為自制質控物適用于BD-FACSCalibur、Coulter-FPICSXL機型流式細胞儀