1、[目的]
　　本研究旨在研究miR-92a在結直腸癌組織和細胞系中的表達水平，探討其影響腫瘤細胞增殖的生物學功能及其分子調(diào)控機制，以期為結直腸癌的分子靶向藥物治療和預后評估提供一定的實驗依據(jù)。
　　[方法]
　　1.采用實時熒光定量PCR技術對8對結直腸癌和癌旁正常組織、4種結腸癌細胞系的miR-92a表達水平進行檢測，研究miR-92a在結直腸癌中的表達情況。
　　2.選擇miR-92a表達最低和最高的兩株結腸

2、癌細胞系HCT116和SW620，對應瞬時轉染miR-92a-3p mimic和miR-92a-3p inhibitor，構建促進miR-92a表達和抑制miR-92a表達的細胞模型。并通過CCK8比色法檢測細胞增殖、克隆形成和流式檢測細胞周期實驗，探討miR-92a對結直腸癌細胞增殖的影響。
　　3.運用軟件Targetscan6.2對miR-92a的下游靶基因進行預測分析。選擇miR-92a可能的調(diào)控靶基因KLF4進行研究，采

3、用免疫印跡法檢測miR-92a高表達和抑制表達的細胞模型中KLF4的表達水平，探討miR-92a與KLF4表達的相關性。
　　4.構建pEZX-MT01-KLF43'UTR野生型(WT)及突變型(Mut)雙熒光素酶報告質粒，與miR-92a-3p mimic及miR-92a-3p mimic negative control共轉染HCT116,探討miR-92a與KLF43'UTR的直接靶向結合作用。
　　5.采用免疫印跡法

4、檢測8例臨床結直腸癌組織樣本KLF4蛋白表達水平，分析CRC組織miR-92a表達水平與KLF4蛋白表達的關系。
　　[結果]
　　1.癌組織(T)中miR-92a的表達水平為（1.294±0.957）fmol/μg total RNA，明顯高于配對癌旁正常組織（TAT）(0.045±0.027) fmol/μg total RNA(P＜0.05)，其相對比值T/TAT為31.94±29.717倍;與內(nèi)鏡下取得正常結腸上皮粘

5、膜組織比較，4種人結腸癌細胞系HT29，SW480，SW620和HCT116中miR-92a的表達水平均顯著高于正常對照組（P＜0.05）。
　　2.對HCT116和SW620對應轉染miR-92a-3p mimic和miR-92a-3p inhibitor后，HCT116中miR-92a的表達較陰性對照組顯著升高，而SW620中miR-92a的表達較陰性對照組顯著降低(P＜0.05)。HCT116轉染miR-92a-3p mim

6、ic后，miR-92a高表達，其細胞增殖活性、克隆形成的數(shù)量均明顯高于對照組(P＜0.05);SW620轉染miR-92a-3p inhibitor后，miR-92a抑制表達，細胞增殖活性、克隆形成的數(shù)量均明顯少于對照組(P＜0.05)。采用流式檢測細胞周期，miR-92a高表達時，S期細胞增多（P＜0.01）;miR-92a表達抑制后，G0/G1期細胞增多，S期細胞減少(P＜0.05)。
　　3.Targetscan6.2預測顯

7、示miR-92a的種子序列與KLF4的3'UTR之間存在靶向結合位點。轉染miR-92a-3p mimic后，HCT116細胞miR-92a的表達水平顯著升高，其KLF4蛋白表達水平下降40.89％;轉染miR-92a-3p inhibitor后，SW620細胞miR-92a的表達水平顯著下降，其KLF4蛋白表達水平升高52.68％，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，miR-92a的表達水平與KLF4的蛋白表達負相關。
　　4

8、.miR-92a-3p mimic與pEZX-MT01-KLF43'UTR野生型或突變型雙熒光素酶報告質粒共轉染HCT116細胞，與陰性對照比較，上調(diào)細胞miR-92a表達能使Firefly熒光素酶活性略有降低，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。
　　5.8例臨床結直腸癌組織中miR-92a水平與KLF4蛋白表達之間有一定的負相關趨勢，r=-0.136，P=0.748，相關性不顯著。
　　[結論]
　　miR-92a在結