1、本文分三個部分進行探討：
　　第一部分：D-半乳糖誘導的擬老化模型的建立
　　目的:建立D-半乳糖誘導的擬老化模型。
　　方法:2月齡Sprague Dawley(SD)雌性大鼠48只隨機分為兩組：其中D-半乳糖組給予D-半乳糖500mg/kg/d,頸背部皮下注射，連續(xù)8周；另一組為對照組（自然老化組），給予等體積生理鹽水，連續(xù)8周。造模結束后，每個組分為三個亞組：4月齡組（造模結束后0個月）、10月齡組（造模結束后6

2、個月）和18個月組（造模結束后14個月）。造模結束后，每只大鼠檢測聽性腦干反應（ABR）；透射電鏡下觀察聽皮層神經(jīng)元細胞超微結構的退行性變化；甲苯胺藍染色觀察聽皮層神經(jīng)元細胞數(shù)目變化；原位末端標記法（TUNEL）檢測聽皮層細胞凋亡。
　　結果：10月齡和18月齡D-半乳糖組與自然老化組相比，32 kHz聽閾顯著提高（P<0.05）。透射電鏡觀察顯示，同齡的D-半乳糖組與自然老化組大鼠相比，細胞核變形、染色質固縮、脂褐素沉積、線粒體

3、腫脹、神經(jīng)纖維脫髓鞘樣變等細胞衰老的超微結構病理變化出現(xiàn)時間更早且退行性變更為顯著。神經(jīng)元染色顯示，D-半乳糖組大鼠聽皮層神經(jīng)元與同齡自然老化組相比密度降低，18月齡差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。TUNEL檢測表明，D-半乳糖組大鼠聽皮層細胞凋亡數(shù)目與同年齡的自然老化大鼠相比，10和18月齡細胞凋亡數(shù)目顯著增加（P<0.01）。
　　結論：隨著年齡的增長，聽皮層神經(jīng)元細胞超微結構退行性變明顯、神經(jīng)元密度下降、凋亡數(shù)目增多；D-

4、半乳糖加速了聽皮層細胞衰老的發(fā)展，促進了老年性聾的發(fā)生。
　　第二部分：端粒、端粒酶與聽覺老化的相關性研究
　　目的：探討端粒、端粒酶與聽覺老化的相關性。
　　方法：2月齡SD雌性大鼠72只隨機分為兩組：D-半乳糖組給予D-半乳糖500mg/kg/d,頸背部皮下注射，連續(xù)8周；對照組給予等體積生理鹽水，連續(xù)8周。造模結束后，每個組分為三個亞組：4月齡組（造模結束后0個月）、10月齡組（造模結束后6個月）和18個月組（造

5、模結束后14個月）。通過分光光度計比色法檢測血清ROS水平；RT-PCR檢測聽皮層端粒長度及端粒酶TERT mRNA的表達；western blotting檢測聽皮層端粒酶蛋白表達水平。
　　結果：自然老化組中，隨著年齡增長，ROS水平增加；端粒長度變短；端粒酶活性下降。與同齡的自然老化大鼠相比，D-半乳糖組中H2O2和MDA水平升高，而T-SOD活性降低；D-半乳糖組中大鼠聽皮層端粒長度在18月齡時縮短有顯著差異（P<0.05）

6、；D-半乳糖組中大鼠聽皮層細胞4月齡、10月齡和18月齡TERT mRNA表達下降均有顯著變化（P<0.05）；D-半乳糖組中聽皮層端粒酶TERT在10月齡和18月齡蛋白表達下降有顯著差異（P<0.01）。
　　結論：隨著年齡的增長，端粒長度變短、端粒酶表達減少。D-半乳糖誘導的擬老化模型加速端粒長度的縮短及端粒酶活性的下降，即加速衰老。
　　第三部分：探討線粒體脫乙?；窼irt3在D-半乳糖誘導的聽皮層早衰中的作用

7、>　　目的：探討Sirt3在D-半乳糖誘導的聽皮層功能障礙中的可能的作用機制。
　　方法：2月齡SD雌性大鼠144只隨機分為兩組：D-半乳糖組給予D-半乳糖500mg/kg/d,頸背部皮下注射，連續(xù)8周；對照組給予等體積生理鹽水，連續(xù)8周。造模結束后，每個組分為三個亞組：4月齡組（造模結束后0個月）、10月齡組（造模結束后6個月）和18個月組（造模結束后14個月）。分光光度計比色法檢測中樞聽皮層MDA含量和SOD2活性；Taqma

8、n探針法實時熒光定量PCR技術檢測聽皮層mtDNA4834 bp的缺失率；RT-PCR檢測Sirt3和SOD2 mRNA表達；western blotting和免疫共沉淀檢測Sirt3和SOD2蛋白表達及SOD2乙酰化水平；免疫熒光檢測Sirt3在聽皮層的定位表達。
　　結果：與自然老化組相比，4月齡，10月齡和18月齡D-半乳糖組中MDA水平分別升高1.18倍,1.39倍(P<0.05)和1.32倍(P<0.05)，SOD2活性

9、分別下降1.21倍,1.36倍(P<0.05)和4.50倍(P<0.01)；CD水平分別升高1.51倍,1.87倍和1.90倍(P<0.01)；Sirt3 mRNA表達分別下降1.32倍（P<0.05）,1.70倍（P<0.01）和4.46倍（P<0.01）；SOD2 mRNA表達分別下降1.06倍,1.11倍（P>0.05）和2.04倍（P<0.01）； Sirt3的蛋白表達分別下降1.46倍,2.10倍和3.47倍（P<0.01），

10、SOD2蛋白水平降低1.03倍,1.10倍（P>0.05）和2.27倍（P<0.05）；SOD2乙?；缴?.70倍,3.09倍和3.31倍（P<0.01）。
　　結論：D-半乳糖誘導的擬老化聽皮層中Sirt3表達下降，使其脫乙?；疭OD2的能力降低，導致SOD2抗氧化活性下降，ROS產(chǎn)生增多，氧化應激出現(xiàn)。氧化應激在聽皮層細胞中蓄積，mtDNA受到氧化損傷，發(fā)生缺失突變，導致線粒體功能障礙，引起細胞超微結構異常，聽皮層細胞凋