1、口腔粘結學，是近代口腔醫(yī)學發(fā)展最為迅速、最為有效的新技術之一，是現(xiàn)代牙科美容修復及口腔保存修復的重要基礎。目前，酸蝕技術的應用使牙釉質粘結獲得了較理想的粘結強度，但由于牙本質自身結構的復雜性，它與不同粘結系統(tǒng)的粘結效果及持久性仍是一個技術難點。
　　作為牙本質有機物主要成分的膠原纖維，是牙本質粘結界面的主要成分之一。在完全去除或保留玷污層后，粘結劑與牙本質脫礦后暴露的膠原纖維網(wǎng)相互作用形成了混合層。但是，無論是全酸蝕還是自酸蝕粘結

2、系統(tǒng)，形成的混合層在長期受到口內環(huán)境中水及酶等各種因素的影響下，未聚合的樹脂單體及水溶性分子會從膠原纖維的表面剝脫，導致膠原纖維暴露，而暴露的膠原纖維有可能在牙本質內固有的基質金屬蛋白酶的作用下發(fā)生降解，使混合層的有機成分損耗，引起粘結界面的退行性變，導致粘結破壞。因此，粘結界面混合層內膠原纖維的降解對于牙本質粘結強度及耐久性的影響不僅是粘結降解機理中亟待解決的問題，而且問題的解決有可能推動粘結退化理論的進一步發(fā)展。
　　本課題首

3、先從膠原降解量和膠原纖維形態(tài)學兩個方面，評價了牙本質粘結的首要步驟——酸蝕對于牙本質內I型膠原纖維降解的影響；進而對牙本質進行不同粘結系統(tǒng)及浸泡老化處理，通過微拉伸實驗測定牙本質粘結強度；同時應用酶聯(lián)免疫吸附法定量測定膠原降解水平，免疫膠體金技術與場發(fā)射掃描電鏡相結合對粘結界面混合層膠原纖維的降解以及混合層形態(tài)進行微觀分析，探討I型膠原纖維降解以及粘結強度隨時間的變化趨勢，以及兩者的相關關系。本實驗的實施為牙本質粘結耐久性的研究提供了直

4、接理論基礎和一定的實驗依據(jù)。
　　主要實驗結果如下：
　　1.酸蝕時間對牙本質內I型膠原纖維降解量影響的實驗結果顯示，隨著37％磷酸處理牙本質時間的延長，膠原降解量呈增加趨勢，酸蝕60s降解的膠原最多，為4.86(1.55)mg/g，30s次之，為2.76(0.87)mg/g，15s組為1.93(0.88)mg/g，10s膠原降解量較少，為0.95(0.38)mg/g，空白對照組也有少量降解，為0.06(0.03)mg/g，

5、兩兩比較，各組間均具有統(tǒng)計學差異(P＜0.005)。
　　2.酸蝕時間對于牙本質內I型膠原纖維形態(tài)學影響的實驗結果表明，通過場發(fā)射掃描電鏡觀察，37％磷酸酸蝕處理牙本質10s可清除玷污層，但微粒樣物質仍覆蓋于牙本質小管口及膠原纖維表面。酸蝕15s可使牙本質小管口清晰開放，可觀察到主纖維及球狀附著物。酸蝕30s暴露的膠原纖維表面更加光滑，球狀附著物減少，可觀察到次級纖維。酸蝕60s暴露的次級纖維數(shù)量增加，主纖維數(shù)量減少，牙本質小管管

6、內結構塌陷，存在纖維斷裂的征象。
　　3.浸泡老化對不同牙本質粘結系統(tǒng)粘結強度影響的實驗結果顯示，一步自酸蝕粘結系統(tǒng)的即刻粘結強度為24.07±7.47MPa，顯著低于兩步自酸蝕粘結系統(tǒng)29.53±7.13MPa及全酸蝕粘結系統(tǒng)29.81±7.34MPa，具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。隨著人工唾液浸泡時間增長，各粘結系統(tǒng)的粘結強度均有所下降。浸泡1月，一步自酸蝕系統(tǒng)的粘結強度為22.11±7.16MPa，顯著低于兩步自酸蝕系統(tǒng)2

7、8.88±10.52MPa及全酸蝕系統(tǒng)28.25±9.32MPa，具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)；浸泡4月，一步自酸蝕系統(tǒng)的粘結強度為20.55±6.06MPa，均數(shù)低于全酸蝕粘結系統(tǒng)21.21±6.39MPa，高于兩步自酸蝕系統(tǒng)18.96±5.31MPa，但組間無統(tǒng)計學差異。對于一步自酸蝕粘結系統(tǒng)，其粘結強度的均數(shù)隨浸泡時間延長而降低，但無統(tǒng)計學差異；對于兩步自酸蝕系統(tǒng)及全酸蝕系統(tǒng)，各自浸泡4月的粘結強度顯著低于浸泡1月以及即刻組，具

8、有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。在即刻、浸泡1月、4月3個時間點，兩步自酸蝕系統(tǒng)和全酸蝕系統(tǒng)的粘結強度兩兩比較，均未見統(tǒng)計學差異。
　　4.浸泡老化及不同粘結系統(tǒng)對牙本質內I型膠原纖維降解量影響的實驗結果顯示，一步自酸蝕粘結系統(tǒng)的即刻膠原降解量為0.18±0.01mg/g，顯著高于兩步自酸蝕粘結系統(tǒng)0.16±0.01mg/g以及全酸蝕粘結系統(tǒng)0.15±0.01mg/g，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。隨著人工唾液浸泡時間延長，各粘結

9、系統(tǒng)的膠原降解量均隨之增高。浸泡1月，兩步自酸蝕粘結系統(tǒng)膠原降解量為0.16±0.01mg/g，顯著低于全酸蝕粘結系統(tǒng)0.18±0.01mg/g和一步自酸蝕粘結系統(tǒng)0.19±0.02mg/g，存在統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。浸泡4月，一步自酸蝕粘結系統(tǒng)的膠原降解量為0.26±0.01mg/g，兩步自酸蝕粘結系統(tǒng)為0.21±0.02mg/g，全酸蝕粘結系統(tǒng)為0.19±0.02mg/g，組間存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。對于全酸蝕粘結系統(tǒng)

10、，即刻膠原降解量顯著低于浸泡1月及4月組，具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，提示其在浸泡初期出現(xiàn)了膠原的大量降解；對于一步自酸蝕粘結系統(tǒng)和兩步自酸蝕粘結系統(tǒng)，浸泡4月的降解量顯著高于1月及即刻組，具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，提示自酸蝕粘結系統(tǒng)是隨著浸泡時間的延長，呈現(xiàn)膠原降解量的逐漸增多。一步自酸蝕粘結系統(tǒng)，較兩步自酸蝕粘結系統(tǒng)，各時間點的膠原降解量大，存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。
　　5.牙本質內I型膠原纖維降解量與粘結強

11、度相關性分析的實驗結果顯示，I型膠原纖維降解量與牙本質粘結強度存在相關關系(r=－0.65,P=0.003)，并且牙本質粘結強度隨著I型膠原纖維降解量的增加而下降。
　　6.牙本質內I型膠原纖維免疫標記定性觀察分析的實驗結果顯示，通過場發(fā)射掃描電鏡觀察，牙本質脫礦后暴露的I型膠原纖維，可以結合抗I型膠原單克隆抗體以及膠體金標記的相應二抗，膠體金標記顆粒分布均勻，可與暴露的膠原纖維上的特定位點結合，實現(xiàn)免疫定位，通過這種方法，可以直

12、觀觀察膠原纖維網(wǎng)絡的立體的空間結構。
　　7.浸泡老化及不同牙本質粘結系統(tǒng)對粘結界面混合層形態(tài)學影響的微觀分析的實驗結果顯示，全酸蝕粘結系統(tǒng)形成的粘結界面混合層厚度不均，可見較長的樹脂突，伸向牙本質小管側壁的樹脂突起，結合二次電子和背散射電子成像，混合層表現(xiàn)出廣泛的免疫標記，特別是深層較淺層的膠體金標記指數(shù)高；兩步自酸蝕粘結系統(tǒng)可見致密均一的混合層以及樹脂突，但膠體金標記較少；一步自酸蝕粘結系統(tǒng)形成的混合層存在孔洞樣缺陷，個別樹脂

13、突形態(tài)存在斷裂現(xiàn)象，膠體金顆粒于混合層內均勻分布。浸泡1月，各粘結系統(tǒng)均表現(xiàn)出混合層免疫標記的減少，全酸蝕粘結系統(tǒng)向牙本質小管側壁伸出的樹脂突起減少，一步自酸蝕粘結系統(tǒng)樹脂突的數(shù)量明顯減少。浸泡4月，各粘結系統(tǒng)均出現(xiàn)混合層結構的破壞，全酸蝕粘結系統(tǒng)混合層個別區(qū)域出現(xiàn)微小裂隙，自酸蝕粘結系統(tǒng)則出現(xiàn)了明顯裂縫，免疫標記進一步減弱。
　　綜上所述，作為牙本質有機基質的主要成分，I型膠原的降解對于牙本質粘結強度及耐久性具有重要的意義。酸蝕