1、四川大學博士學位論文血管內皮生長因子基因轉染恢復放療后組織血管生成的實驗研究姓名：王代友申請學位級別：博士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：溫玉明20030525血管內皮生長因子基因轉染恢復放療后組織血管生成的實驗研究全文摘要日的構建血管內皮生長因子基因的真核表達質粒：應用血管內皮生長因子基因體內轉染的方法恢復放療后組織血管生成能力。方法采用逆轉錄聚合酶鏈式反應(RTPCR)技術，從人肝癌細胞株SMMC7721中擴增出血管內皮生長因子VEGF

2、l65基因片段，用DNA重組技術將VEGFl65eDNA定向插入pcDNA3真核表達載體上，構建成peDNA3／VEGFt65重組質粒，并用酶切電泳分析、PCR擴增電泳分析及DNA測序的方法對重組質粒進行鑒定：應用脂質體介導的基因轉染方法將重組質粒pcDNA3／VEGFl65導入體外培養(yǎng)的大鼠成肌細胞內，采用免疫組化的方法觀察其在細胞內的表達；選40只成年雄性Wistar大鼠右后肢為照射部位進行照射，每只大鼠放射總量為30GY，放療完成

3、后，行頸總動脈插管血管造影檢查模型大鼠兩側后肢血管數(shù)目的變化，取兩側的后肢肌肉組織標本行血管密度、平均截面積、平均管徑及血管超微結構檢查，以確定軟組織血管放療損傷模型是否建立；用肌肉多點注射轉染的方法將重組質粒pcDNA3／VEGFl65轉移至放療損傷模型大鼠右后肢放療損傷區(qū)肌細胞內，而左側后肢作為治療對照組轉染空質粒pcDNA3，每次每只大鼠轉染質粒200扯g，共治療2次，間隔2周，治療結束后行VEGFl65mRNA表達檢測、VEGF