1、目的：癲癇是人類一種慢性腦功能障礙綜合癥，其發(fā)病機制和治療研究一直是醫(yī)學上的難題。近幾年研究顯示星形膠質細胞的改變與癲癇發(fā)病密切相關。本研究以馬桑內酯為致癇劑，制備Sprague Dawley(SD)大鼠急性癲癇模型，對比觀察癲癇模型組和妥泰治療組星形膠質細胞活性及超微結構變化，探討妥泰對星形膠質細胞的影響，為了解星形膠質細胞與癲癇的關系，提供實驗依據(jù)。 方法：將成年雄性SD大鼠(250g-300g)40只，隨機分成4組：正常對

2、照組、生理鹽水組、癲癇模型組和妥泰治療組，每組10只。正常對照組未給予任何干預措施直接固定取材；癲癇模型組和妥泰治療組用馬桑內酯為致癇劑(1μl/100g)制作急性癲癇模型；生理鹽水組用相同劑量的生理鹽水替代致癇劑。觀察癲癇模型表現(xiàn)以確定模型是否制作成功。妥泰治療組用妥泰灌胃治療7天(25 mg/100g)，1次/日；癲癇模型組和生理鹽水組也用相同劑量的生理鹽水替代妥泰灌胃7天。以40g/L的多聚甲醛灌注固定后取大腦中央前回，常規(guī)脫水、

3、包埋、石蠟切片(片厚4 μm)，對星形膠質細胞做神經(jīng)膠質酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAp)(1：150)免疫組織化學染色，對照大鼠腦圖譜定位于大腦皮層中央前區(qū)，采用Ax70顯微成像系統(tǒng)，關閉自動白平衡功能并保持相同的光源、光學條件，在此區(qū)域內隨機照5張片，用ImagePro-Plus 6.0(IPP6.0)圖像分析軟件分析，測得每張照片中陽性細胞數(shù)量、平均光密度(average opti

4、cal，AO)和積分光密度(integrated optical density，IOD)，取同一指標5張照片的平均值為該指標一例標本的代表值。每張標本均依此法在相同區(qū)域照像，測得4組共200例標本的統(tǒng)計數(shù)據(jù)均以-X±S表示；樣本經(jīng)戊二醛后固定，丙酮脫水，樹脂618包埋，超薄切片后于10000倍下隨機選擇神經(jīng)氈攝片，每例標本攝5張，共200張照片，同樣用IPP 6.0圖像分析軟件分析，測神經(jīng)氈內膠質細胞突起和神經(jīng)元突起的面積分數(shù)和單位面

5、積(64μm2)內膠質細胞胞體的切面數(shù)(面數(shù)密度)，匯總結果均以(-x)±S表示。通過SPSS15.0統(tǒng)計分析軟件包對免疫組化和電鏡測得的各組數(shù)據(jù)分別作正態(tài)分布檢驗和方差齊性檢驗，以單因素方差分析(one-way ANOVA)統(tǒng)計結果，并用Bonferrioni法做多組數(shù)據(jù)間兩兩比較。 結果： ①動物行為觀察，癲癇模型大鼠在注射致癇劑后5～15 min內開始出現(xiàn)癲癇發(fā)作，60 min后動物癲癇發(fā)作均達到Ⅲ級或以上(Rac

6、ine分級)。 ②GFAP免疫組化顯示：被染成棕色的GFAP陽性物質存在于星形膠質細胞胞漿，并呈現(xiàn)出整個細胞的輪廓及突起，胞核被蘇木素染為深藍色，核小居于細胞中央。神經(jīng)元胞核被染成淺藍色，核大，核仁核膜清晰可見，與星形膠質細胞胞核有明顯區(qū)別。正常組星形膠質細胞較少，突起短；生理鹽水組與正常組相似，其GFAP陽性細胞數(shù)量、AO及IOD與正常組相比均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；模型組變化較明顯，可見星形膠質細胞數(shù)量增多、細胞腫大、

7、突起增多，呈明顯的星形，與正常組相比其細胞數(shù)量及IOD有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；治療組星形膠質細胞腫大較模型組略減輕，突起減少，與模型組相比其GFAP陽性細胞數(shù)量及IOD有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，與正常組相比細胞數(shù)量及IOD有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 ③透射電鏡結果，正常組星形膠質細胞胞質較少，細胞器不發(fā)達，基質較疏松，著色均勻，有疏松分布的核糖體和內質網(wǎng)，線粒體數(shù)量多，體積小，可見溶酶體。神經(jīng)氈內有無髓神經(jīng)纖維、有

8、髓神經(jīng)纖維和大量的星形膠質細胞突起。正常對照組與生理鹽水組相比細胞突起的面積分數(shù)和面數(shù)密度無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。模型組與正常組相比星形膠質細胞胞體因腫脹而增大，細胞質電子密度明顯低而清亮，線粒體和溶酶體腫脹。神經(jīng)氈內膠質細胞突起明顯并有增粗，其終末部分變尖，細胞外間隙縮小，神經(jīng)元的胞突及有髓神經(jīng)纖維和無髓神經(jīng)纖維改變不明顯，細胞突起的面積分數(shù)和面數(shù)密度均有統(tǒng)計學意義(P<0．05)，其面數(shù)密度比正常組減少。治療組細胞電子密度明顯

9、增高，胞質及突起腫脹明顯減輕，細胞突起的面積分數(shù)和面數(shù)密度均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其面數(shù)密度比模型組增大。 結論： ①馬桑內酯誘導的急性癲癇動物模型為一種較為可靠的癲癇模型制作方法。 ②癲癇發(fā)作狀態(tài)下，GFAP陽性細胞增多，細胞內GFAP表達增強，電鏡下星形膠質細胞的突起腫脹、增生，提示星形膠質細胞受癲癇影響反應性增加，星形膠質細胞處于激活狀態(tài)。 ③妥泰對癲癇狀態(tài)下的星形膠質細胞有保護作用，可使G