1、目的：探索褪黑素增強病毒唑抗呼吸道合胞病毒(Respiratory Syncytial Virus，RSV)感染的作用及其部分機制；觀察褪黑素(MT)對感染鼠的免疫功能影響，為褪黑素可能應(yīng)用于臨床提供理論依據(jù)。 方法：①體外試驗中，采用微量細胞病變抑制法，通過四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT)，觀察兩種藥物單獨使用以及聯(lián)用時分別對RSV在人喉癌上皮細胞(Hep-2)所致細胞病變抑制效應(yīng)，按Reed-muench法計算出藥物致細胞半數(shù)

2、中毒濃度(TD<,50)、半數(shù)50％病變抑制的藥物濃度(IC<,50>)和治療指數(shù)(TI)，用統(tǒng)計學(xué)及金正均法q值判斷兩藥的相互作用，以及MT在不同給藥時間時病毒唑?qū)SV的抑制作用。②體內(nèi)試驗中，以呼吸道合胞病毒滴鼻感染小鼠建立病毒性肺炎模型，褪黑素和病毒唑進行灌胃給藥。實驗分為正常對照組、病毒模型組、病毒唑組(17.5、35、70mg/kg 3個劑量組)、褪黑素組(5、1 0、20mg/kg 3個劑量)、褪黑素和病毒唑聯(lián)合組(9個劑

3、量組)。分別從小鼠眼球取血，收取血清。斷頸處死小鼠，取肺組織，無菌取脾臟。觀察褪黑素和病毒唑單獨使用以及聯(lián)合使用時對小鼠病毒性肺炎的治療作用；用刀豆蛋白A(ConA)和脂多糖(LPS)作為誘導(dǎo)劑，MTT法檢測小鼠脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能；以YAC-1細胞作為靶細胞用MTT法檢測小鼠NK細胞活性；采用SRBC的定量溶血測定法，觀察褪黑素對小鼠抗體形成細胞能力的影響；ELISA法檢測血清樣品中IFN-γ水平；將右肺中葉取出后立即用10％的福爾馬

4、林固定，常規(guī)切片HE染色后在光鏡下觀察。 結(jié)果： 一、體外實驗 ①褪黑素和病毒唑?qū)ep．2細胞的TD<,50>分別為2655±235 mg/L和3874±356mg/L。 ②病毒唑?qū)粑篮习《揪哂幸种谱饔?，且有濃度依賴性關(guān)系，其IC<,50>為280±46mg/L，TI為9.48±3.8。 ③兩種藥物聯(lián)合使用時，對病毒的抑制作用明顯增加，褪黑素25、50mg/L分別與病毒唑50、100、20

5、0mg/L 聯(lián)合使用時，q值均>1.15，呈現(xiàn)協(xié)同作用。統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果均顯示兩種藥物間存在交互作用。褪黑素能增強病毒唑的抑制RSV感染作用。 ④ MT同時處理或者預(yù)處理，RSV對病毒唑的敏感性均提高，而且MT預(yù)處理24h的效果更優(yōu)于同時處理。 二、體內(nèi)試驗 ① RSV感染鼠治療結(jié)果顯示，病毒唑可以明顯降低小鼠肺指數(shù)值，其有效濃度為17.5 mg．kg<'-1>，隨著藥物劑量增加，療效增強。 ②經(jīng)褪黑素大、

6、中、小三個劑量組(20、10、5mg/kg)的處理，其小鼠脾臟淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能、NK細胞活性、抗體形成細胞能力與模型組相比，具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。褪黑素能夠明顯提高小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能、NK細胞活性以及抗體形成細胞能力。 ③褪黑素能提高淋巴細胞分泌IFN-γ的能力，并呈現(xiàn)劑量依賴性。 ④病理學(xué)結(jié)果顯示，病毒唑能減輕肺組織的炎性損傷，但褪黑素聯(lián)合應(yīng)用能夠明顯減輕肺組織的炎性損傷。 結(jié)論： ①體外抗

7、病毒實驗表明，病毒唑能夠抑制RSV細胞病變，且具有濃度依賴性關(guān)系。褪黑素能夠促進病毒唑的抗病毒能力，兩者聯(lián)合運用較病毒唑單獨使用具有更好的效果。 ②體內(nèi)抗病毒實驗表明，病毒唑?qū)Ω腥臼蟮牟《拘苑窝拙哂幸欢ǖ囊种谱饔?，褪黑素能夠增強病毒唑的抗病毒作用。兩者?lián)合后可以增強抑制RSV的作用，達到優(yōu)勢互補的效果。 ③褪黑素能夠增強病毒性肺炎模型小鼠的淋巴細胞轉(zhuǎn)化功能、NK細胞活性以及抗體形成細胞能力，并且提高血清中的IFN-γ水平