1、肺癌的發(fā)病率與死亡率已逐漸占據(jù)各種疾病的首位。由于缺乏有效的治療手段，特別是不能很好地控制肺癌的轉(zhuǎn)移，常常導(dǎo)致治療的失敗。防止和阻斷轉(zhuǎn)移是肺癌治療取得成功的關(guān)鍵，也是國(guó)內(nèi)外肺癌研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外越來(lái)越重視癌癥的轉(zhuǎn)移和血瘀、活血化瘀之間的關(guān)系。綜合近年來(lái)研究進(jìn)展及導(dǎo)師前期研究成果我們可以認(rèn)為，中醫(yī)的“血瘀證”與腫瘤的轉(zhuǎn)移有密切的關(guān)系，“血瘀證”可能是腫瘤轉(zhuǎn)移的本質(zhì)之一。本研究就是在此認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)上，探索中晚期肺癌這一死亡率極高(

2、其死因主要為轉(zhuǎn)移的發(fā)生)疾病的“血瘀證”的情況，探索活血化瘀藥對(duì)這一作用干預(yù)的可能靶點(diǎn)，以期進(jìn)一步深化中醫(yī)對(duì)原發(fā)性支氣管肺癌轉(zhuǎn)移的認(rèn)識(shí)。 1綜述部分1.1文獻(xiàn)綜述一　　通過(guò)對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移、血瘀證、及活血化瘀治療古代文獻(xiàn)及近二十余年來(lái)研究進(jìn)展的系統(tǒng)回顧，進(jìn)一步明確腫瘤轉(zhuǎn)移的“血瘀證”本質(zhì)及活血化瘀中藥對(duì)其的干預(yù)作用，并提出存在的問(wèn)題及解決的策略。1.2文獻(xiàn)綜述二　　綜述有關(guān)肺癌中醫(yī)辨證分型的臨床與基礎(chǔ)研究現(xiàn)狀?？偨Y(jié)了肺癌中醫(yī)分

3、型與肺癌國(guó)際TNM分期、病理分型、近遠(yuǎn)期療效及蛋白質(zhì)和多肽、免疫學(xué)、血液流變學(xué)、微量元素等的關(guān)系。為肺癌中醫(yī)證型的研究提供了可借鑒的資料，提出肺癌中醫(yī)證型研究存在的問(wèn)題及研究策略。 2臨床研究2.1 300例中晚期原發(fā)性支氣管肺癌血瘀證分布規(guī)律的調(diào)查研究　　通過(guò)為Ⅲ與Ⅳ期原發(fā)性支氣管肺癌患者填寫(xiě)《原發(fā)性支氣管肺癌證型規(guī)律調(diào)查表》，觀察血瘀證在中晚期原發(fā)性支氣管肺癌中所占的比重及分布規(guī)律，分析血瘀證在不同病理類型的中晚期肺癌患

4、者中的分布；血瘀證在不同分化程度的中晚期肺癌患者中的分布；血瘀證在不同分期的中晚期肺癌患者中的分布；血瘀證在不同轉(zhuǎn)移部位的中晚期肺癌患者中的分布；血瘀證在合并不同中晚期肺癌常見(jiàn)并發(fā)癥患者中的分布；血瘀證在不同體質(zhì)狀況(KPS評(píng)分)的中晚期肺癌患者中的分布。結(jié)果顯示，隨著中晚期原發(fā)性支氣管肺癌病理類型惡性程度的增高，分化程度的變低，肝轉(zhuǎn)移、對(duì)側(cè)肺轉(zhuǎn)移、骨轉(zhuǎn)移、鎖骨上淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等的發(fā)生，血瘀證構(gòu)成比有增高的趨勢(shì)。通過(guò)觀察血瘀證各主要癥狀及體

5、征在中晚期原發(fā)性支氣管肺癌患者中的出現(xiàn)頻率及分布規(guī)律，發(fā)現(xiàn)肺癌血瘀證有其獨(dú)特的特點(diǎn)，故我們對(duì)腫瘤?？粕踔练伟２《紤?yīng)建立能反映其疾病本身特點(diǎn)的血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)甚至是量化、能分出輕重程度的血瘀證診斷標(biāo)準(zhǔn)，以更好的指導(dǎo)臨床診斷、療效評(píng)價(jià)以及中藥新藥的臨床試驗(yàn)。2.2中晚期原發(fā)性支氣管肺癌患者與正常人血小板表面粘附蛋白表達(dá)異同的臨床觀察及意義　　采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)正常健康志愿者及中晚期原發(fā)性支氣管肺癌患者Ⅲ、Ⅳ期肺癌患者之間血小板表面粘附蛋

6、白CD36、TSP、CD63、CD62的表達(dá)狀況的不同，以觀察其血小板的激活的不同狀態(tài)。結(jié)果顯示肺癌患者CD36+TSP+、CD36+TSP-、CD63+CD62+、CD63-CD62+、CD63+CD62-血小板的數(shù)目高于正常人的表達(dá)，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。同時(shí)肺癌患者CD36+TSP+血小板CD36表達(dá)的平均熒光道數(shù)及CD62+CD63+血小板CD63表達(dá)的平均熒光道數(shù)也高于正常人的表達(dá)，兩者比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。Ⅳ期肺癌患者CD36+

7、TSP-、CD63-CD62+、CD63+CD62+血小板的數(shù)目高于Ⅲ期患者，兩者比較有顯著性差異。CD62+CD63+血小板CD62及CD63表達(dá)的平均熒光道數(shù)Ⅳ期肺癌患者高于Ⅲ期患者，兩者比較有顯著性差異。從而可以認(rèn)為，中晚期肺癌患者血小板呈廣泛激活狀態(tài)，與正常人比較有極顯著的差異。且中晚期原發(fā)性支氣管肺癌血小板激活狀態(tài)和腫瘤的分期及有無(wú)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)。進(jìn)而可以認(rèn)為“血瘀證”不單是原發(fā)性支氣管肺癌發(fā)生的機(jī)理之一，同時(shí)也是原發(fā)性支氣管肺

8、癌轉(zhuǎn)移的本質(zhì)之一。 3實(shí)驗(yàn)研究3.1MTT法檢測(cè)欖香烯對(duì)PG、PAa細(xì)胞增值的抑制作用及PDGF-AB和TGF-β1對(duì)PG、PAa細(xì)胞增殖的影響　　MTT酶標(biāo)分析法檢測(cè)不同劑量欖香烯注射液對(duì)PG、PAa細(xì)胞增殖的抑制作用及不同劑量PDGF-AB和TGF-β1對(duì)PG、PAa細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果顯示，欖香烯對(duì)肺癌細(xì)胞系PG細(xì)胞和PAa細(xì)胞均有一定的抑殺作用，其對(duì)PG及PAa細(xì)胞的IC50分別約為75μg/ml和37.5μg/ml

9、。而主要由血小板分泌的兩種細(xì)胞因子PDGF-AB和TGF-β1對(duì)肺癌細(xì)胞系PG和PAa的增殖基本上無(wú)明顯的促進(jìn)或抑制的作用。3.2欖香烯對(duì)肺癌細(xì)胞系表面所表達(dá)與侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)的粘附蛋白的影響　　利用激光共聚焦顯微鏡觀察高轉(zhuǎn)移人巨細(xì)胞肺癌細(xì)胞PG和低轉(zhuǎn)移人肺腺癌細(xì)胞PAa表達(dá)的血小板免疫相關(guān)抗原CD42a、TSP、CD9的表達(dá)情況；利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)的高轉(zhuǎn)移人巨細(xì)胞肺癌細(xì)胞PG和低轉(zhuǎn)移人肺腺癌細(xì)胞PAa表達(dá)的血小板免疫相關(guān)抗原CD42

10、a、TSP、CD9的表達(dá)情況及二種癌細(xì)胞與高、中、低濃度的欖香烯注射液共同孵育后CD42a、TSP、CD9的表達(dá)改變。結(jié)果顯示，利用激光掃描可見(jiàn)CD9、CD42a、TSP均勻的表達(dá)于細(xì)胞表面。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，PG細(xì)胞表達(dá)的CD9陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和平均熒光強(qiáng)度低于PAa細(xì)胞，而PG細(xì)胞表達(dá)的CD42a、TSP陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)目和平均熒光強(qiáng)度均高于PAa細(xì)胞，從而進(jìn)一步印證了PG細(xì)胞系的轉(zhuǎn)移能力高于PAa細(xì)胞系。從總的趨勢(shì)來(lái)看，欖香烯注射液增高P

11、G和PAa細(xì)胞CD9的表達(dá)，降低其CD42a、TSP的表達(dá)，這可能是欖香烯注射液抗肺癌轉(zhuǎn)移的分子機(jī)理。3.3人肺癌細(xì)胞系PG、PAa對(duì)重組基底膜侵襲作用及欖香烯及PDGF-AB、TGF-β1對(duì)其的影響　　利用Transwell細(xì)胞培養(yǎng)小室觀察PG細(xì)胞和PAa細(xì)胞對(duì)重組基底膜的侵襲作用及高、中、低濃度的欖香烯注射液對(duì)這一作用的影響。觀察血小板激活后釋放產(chǎn)物PDGF(PDGF-AB)、TGF-β1與PG細(xì)胞和PAa細(xì)胞共同孵育后對(duì)它們侵

12、襲行為的影響，并觀察高、中、低濃度的欖香烯注射液對(duì)這個(gè)過(guò)程的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，PG的侵襲行為明顯高于PAa。從而顯示了兩種肺癌細(xì)胞系不同的侵襲特性，發(fā)現(xiàn)欖香烯注射液對(duì)PG及PAa細(xì)胞的侵襲均有明顯的抑制作用，從而說(shuō)明欖香烯對(duì)肺癌細(xì)胞侵襲的干預(yù)作用。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示，PDGF-AB和TGF-β1能明顯促進(jìn)PG和PAa細(xì)胞的侵襲行為，從一個(gè)側(cè)面進(jìn)一步說(shuō)明血瘀證和肺癌轉(zhuǎn)移的關(guān)系，欖香烯對(duì)這一過(guò)程有明顯的抑制作用。參考前章MTT的結(jié)果，在