1、根據(jù)己報道的甘蔗ACO基因的序列，在讀碼框外設計特異引物，通過RT-PCR技術，克隆了甘蔗ACO基因編碼區(qū)969bp的cDNA片段，分別正向和反向插入植物表達載體pBI121的CaMV35S啟動子和NOS終止子之間，構建了ACO基因的正義植物表達載體pBIaco和反義植物表達載體pBIantiaco，該載體的抗性選擇標記為NPT Ⅱ基因。 利用凍融法分別將正義植物表達載體pBIaco和反義植物表達載體pBIantiaco導入根癌

2、農(nóng)桿菌菌株EHAl05中，通過農(nóng)桿菌介導法，將ACO正、反義基因導入煙草K346。經(jīng)PCR篩選，獲得34株正義和28株反義轉基因植株，轉化率分別為24％和31％。取部分PCR陽性植株進行Dot-Southem雜交檢測，證明外源基因已整合入煙草的基因組中。采用氣相色譜法對轉基因煙草進行內源乙烯釋放量測定，結果顯示，正義轉基因煙草的乙烯釋放比對照平均增加77.22％，而反義轉基因煙草的乙烯釋放量僅為對照的31.67％，達到極顯著差異。說明甘