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文檔簡(jiǎn)介
1、目的: 研究銀杏葉提取物(ginkgo biloba extract,GBE)對(duì)高糖培養(yǎng)的人晶狀體上皮細(xì)胞(human lens epithelial cells,HLECs)凋亡的保護(hù)作用及其可能的分子機(jī)理。 方法: 人晶狀體上皮細(xì)胞B3細(xì)胞系用DMEM低糖培養(yǎng)基(葡萄糖終濃度5.56mmol/L)培養(yǎng),將培養(yǎng)的細(xì)胞分為正常對(duì)照組(NS組,葡萄糖終濃度5.56 mmol/L)、高糖組(HG組,葡萄糖終濃度50 mmol/L)、
2、GBE低濃度組(GL組,10μg/mlGBE-DMEM高糖培養(yǎng)液),GBE中濃度組(GM組,20μg/ml GBE-DMEM高糖培養(yǎng)液),GBE高濃度組(GH組,40μg/ml GBE-DMEM高糖培養(yǎng)液),芐達(dá)賴(lài)氨酸(bendazac lysine,BDL)對(duì)照組(BDL組,0.5μmol/L BDL-DMEM高糖培養(yǎng)液)。用四甲基偶氮唑鹽(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)比色法測(cè)定HLECs的活力;
3、流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定HLECs的凋亡百分率;Hoechst33258熒光染色觀(guān)察凋亡細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)變化;可見(jiàn)光分光光度法測(cè)定胞漿過(guò)氧化氫酶(catalase,CAT),谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px),總抗氧化能力(total antioxidativecapability,T-AOC)和總超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)四大抗氧化指標(biāo)的水平、醛
4、糖還原酶(aldose reductase,AR)及半胱氨酸基天冬氨酸-特異性蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase-3,caspase-3)活性的變化;免疫印跡法測(cè)定胞漿內(nèi)Bcl-2和Bax的表達(dá)。 結(jié)果: 與低糖對(duì)照組相比,高糖組的HLECs活力明顯降低,細(xì)胞凋亡百分率明顯升高(P<0.01),較多細(xì)胞出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)改變。與高糖組相比,GBE低中高濃度組的HLE
5、Cs活力增強(qiáng),細(xì)胞凋亡百分率顯著降低且隨GBE濃度增加作用更明顯(P<0.01),典型的凋亡細(xì)胞核也逐漸減少;GM組和GH組的CAT,GSH-Px,T-AOC和T-SOD的水平顯著提高(P<0.05 or P<0.01),而GL組和BDL組儀提高T-AOC,GSH-Px的水平,對(duì)CAT、T-SOD無(wú)明顯作用。GBE還能明顯降低AR的活性(P<0.01);與高糖組相比,GBE低中高濃度組Bcl-2的表達(dá)增加,Bax的表達(dá)降低,Bax/Bc
6、l-2的比值明顯降低(P<0.01),caspase-3的活性顯著降低(P<0.01),且均隨藥物濃度增加作用增強(qiáng);BDL組的Bax/Bcl-2的比例和caspase-3的活性也有降低(P<0.05 or P<0.01)。 結(jié)論: 高糖能誘發(fā)HLECs凋亡,對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生損傷作用;GBE能明顯抑制高糖誘導(dǎo)的HLECs凋亡并對(duì)細(xì)胞有保護(hù)作用;GBE有很強(qiáng)的抗氧化能力和抑制AR的作用,并能明顯降低Bax/Bcl-2的比值,抑制caspa
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