1、Twist基因是1987年在果蠅中發(fā)現(xiàn)的一個新基因，能編碼堿性的螺旋-環(huán)-螺旋DNA結合的轉錄因子，在不同的種屬之間其核苷酸和氨基酸序列高度保守。人Twist基因位于7p21.2，含有2個外顯子和1個內(nèi)含子，其中第1個外顯子長為772 bP.包含整個編碼區(qū)域。人Twist蛋白由202個氨基酸，分子量為26 kD，在胚胎的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。目前，Twist作為重要的癌基因，已證實在多種實體瘤中通過多種機制參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過程。到

2、目前為止，Twist與髓系白血病的關系尚不明確。
　　 為了探索Twist1在髓系白血病中的作用，我們首先構建了Twist1的真核表達載體，利用慢病毒感染人白血病細胞系K562、U937，再通過。FACS分選獲得陽性瞬時轉染的細胞，并用qRT-PCR和Western blot方法鑒定轉染效果及目的基因的表達情況。通過生長曲線、細胞周期、集落形成實驗來評價腫瘤細胞增殖、生長特性、集落形成能力，AnnexinV/7-AAD方法檢測腫

3、瘤細胞凋亡情況，transwell方法檢測腫瘤細胞的遷移能力，通過多藥耐藥實驗檢測了腫瘤細胞的生存能力。結果發(fā)現(xiàn)，與轉染空載體對照和未轉染的K562細胞相比，過表達Twist1的K562細胞生存能力顯著提高，遷移能力增強（p<0.05），細胞周期S期增加，對藥物的敏感程度下降。與K562細胞系相似，與轉染空載體對照和未轉染的U937細胞相比，過表達Twist1的U937也有同樣的效應，即遷移能力增強，細胞周期S期顯著增加，生存能力顯著提

4、高，對藥物的敏感程度下降。提示Twist1對腫瘤細胞的生存和發(fā)展進程起促進作用并且誘導腫瘤細胞耐藥。
　　 我們進一步用基因芯片研究了干擾Twist1表達的K562細胞株和轉染空載體的細胞的基因表達差異，結果發(fā)現(xiàn)，干擾Twist1表達的K562細胞株CDKN1C、CDC14B、ANAPC5等與細胞周期相關的基因轉錄上調(diào)，CCNE2、TFDP1等基因的下調(diào)，這與我們實驗中細胞周期的測定發(fā)現(xiàn)細胞阻滯在G1期相符，強烈抑制G1期向S期

5、的轉換。干擾Twist1 mRNA的表達結果提示，Twist1下調(diào)使慢性粒細胞白血病急變細胞系K562生長抑制，提示Twist1對腫瘤細胞的生存是必不可少的。
　　 基因芯片研究結果還發(fā)現(xiàn)，干擾Twist1表達的K562細胞株FOXO3、HIPK2等促進腫瘤細胞凋亡的腫瘤抑制基因均有較大程度上調(diào)，同時與自噬相關的基因如ATG12下調(diào)，使得腫瘤細胞凋亡增加同時對藥物的敏感性增加，這與實驗結果相吻合。提示Twist1對促進腫瘤細胞耐