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文檔簡介
1、豬偽狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV)屬于皰疹病毒科、皰疹病毒屬,又被稱為豬皰疹病毒1型,可以引起多種家畜和野生動物感染發(fā)生偽狂犬病,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大經(jīng)濟損失。
細胞自噬能夠通過自我消化細胞成分的方法調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)合成和蛋白質(zhì)降解之間的平衡。細胞凋亡在生物體進化、維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定以及在多個系統(tǒng)的發(fā)育中起著重要的作用。細胞自噬與凋亡是引起細胞程序性死亡的主要途徑,二者共同決定了細胞在受到病原入侵時的命運,因此自
2、噬和凋亡之間的平衡對病毒的復制周期的實現(xiàn)和致病性有著至關(guān)重要的影響。自噬和凋亡具有部分通用的上游信號途徑,有時可能會導致自噬和凋亡的共同發(fā)生;同時,細胞可以在自噬和凋亡之間互相轉(zhuǎn)化。本實驗結(jié)果表明PRV感染對細胞自噬反應(yīng)有雙重影響,在感染早期階段,PRV能夠誘導細胞自噬;隨著病毒蛋白的表達,細胞自噬反應(yīng)被抑制。通過流式細胞檢測技術(shù)和Western blot分析發(fā)現(xiàn)PRV能夠誘導Vero細胞發(fā)生caspase依賴性細胞凋亡。本實驗通過化學
3、抑制劑和誘導劑調(diào)節(jié)PRV引起的細胞自噬或凋亡,研究表明,在自噬體形成階段誘導細胞自噬能夠抑制細胞凋亡;在自噬體形成階段抑制細胞自噬能夠誘導細胞凋亡;抑制自噬體與溶酶體融合后的降解能夠促進細胞凋亡;用Caspase-3抑制劑抑制細胞凋亡后,自噬相關(guān)蛋白LC3-Ⅰ至LC3-Ⅱ的轉(zhuǎn)化和SQSTM1/P62的降解增多。以上結(jié)果表明PRV引起的細胞自噬和凋亡作用拮抗。自噬與凋亡的相互關(guān)系能夠影響PRV的復制,自噬增多或者自噬體與溶酶體融合后的降解
4、被抑制均能抑制病毒的復制。
已有研究表明PRV早期蛋白US3能夠通過活化PI3 K/AKT途徑抑制細胞凋亡,為了確定US3能否通過該途徑對細胞自噬產(chǎn)生影響,本實驗通過PI3K、AKT抑制劑處理感染PRV的細胞后,發(fā)現(xiàn)細胞自噬增多。在感染HeN1病毒株的細胞中轉(zhuǎn)染US3質(zhì)粒,與對照細胞相比,轉(zhuǎn)染US3質(zhì)粒后AKT的磷酸化增多,細胞自噬被抑制;分別用△US3 HeN1病毒株和HeN1病毒株感染Vero細胞,研究表明感染△US3 H
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