1、龍眼起源于我國，是我國南方特產(chǎn)果樹之一，種質(zhì)資源十分豐富。但長期以來，對龍眼資源的分類和利用，都是采用林奈和恩格勒的形態(tài)特征分類法，往往有些種、品種和品系在外貌和彩態(tài)特征上十分相似，但親緣關系和遺傳特性卻相差巨大，使得龍眼的分類地位及親緣關系一直存在著較多的爭議，并給龍眼的新品種培育和資源利用帶來困難。本試驗以廣西區(qū)域內(nèi)廣泛收集的60個龍眼品種為試材，應用lSSR分子標記技術，探討龍眼的分類和品種之間親緣關系的研究。試驗結果表明：

2、 1、通過對SDS、CTAB和改良CTAB法三種基因組DNA提取方法的比較，從純度、產(chǎn)率等方面考慮，認為改良CTAB法較為適合龍眼基因組DNA的提取。采用該方法提取的龍眼基因組DNA，經(jīng)電泳檢測，主帶清晰，無降解，分光光度計檢測，A<,200>/A<,280>的值在1.81-1.84之間，符合lSSR反應的要求。 2、通過對Tag DNA聚合酶,dNTP,模板DNA,Primer不同濃度的優(yōu)化試驗及對PCR反應程序的篩選，確定

3、了合適的反應體系和反應程序，從而建立了龍眼的l SSR分析技術體系。在20 μl反應體系中，模板DNA 75ng，Primer 5 μ moI， rTaq poI ymerase 1 U，dNTP 4 mmoI， Tris-HCl(pH 8.3)200 μmoI。反應程序為：預變性，94℃5min；變性，94、C1min；退火1 min；延伸，72℃2min；40個循環(huán)，72℃延伸10min，4℃保存。 3、利用篩選得到的12條

4、lSSR引物對全部60個龍眼品種進行PCR擴增，共擴增產(chǎn)生119條總帶，其中共有帶52條，多態(tài)性條帶67條，多態(tài)性比率為56.30％。擴增片段長度分布在1OObp-2000bp之間，平均每個引物能擴出1O條帶。 4、運用NTSYS軟件，采用Dice相似系數(shù)分析ISSR反應結果，得到了60個品種間的親緣關系樹狀圖。以0.80作為相似系數(shù)的分界點，60個樣品通過基因組ISSR分成2大類：龍荔單獨為一類，另一類在相似系數(shù)0.85的水平

5、將其余的59個龍眼材料分為7個品種群：品種群I：東壁、未知實生2；品種群Ⅱ：立冬本；品種群Ⅲ：烏龍嶺、九葉烏、佳圓；品種群Ⅳ：靈龍、早白露；品種群V：車站、桂香、香蜜、小廣眼等12個品種(系)；品種群Ⅵ：大烏圓、大廣眼、儲良、古山二號、石硤等27個個品種(系)；品種群Ⅶ：青山水柜、洪武本、草灰本、處署本、桂明等12個品種(系)。 5、利用ISSR技術可以對基因組的所有序列直接分析，不受環(huán)境的影響，在分子水平上利用ISSR技術對6