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文檔簡介
1、目的:觀察大鼠重癥急性胰腺炎血清IL-6水平與腸上皮Claudins蛋白表達(dá)變化,初步探討Claudins蛋白與IL-6在重癥急性胰腺炎腸粘膜屏障損傷中的關(guān)系。
方法: SD大鼠58只,體重320~350g,隨機(jī)分成對照組(n=10),實(shí)驗組(n=48)。實(shí)驗組分為3、12、24、48h四個時間點(diǎn),每個時間點(diǎn)12只。所有大鼠在實(shí)驗前禁食12h,自由飲水。實(shí)驗組分兩次間隔1h腹腔內(nèi)注射20%L-精氨酸溶液(2.5g/kg×2),
2、對照組大鼠同法予等量無菌生理鹽水。對照組大鼠在末次注射后于頸內(nèi)靜脈取血2ml后立即處死,實(shí)驗組大鼠在末次注射后3、12、24、48h四個時間點(diǎn)隨機(jī)各取12只于頸內(nèi)靜脈取血2ml后處死,取出胰腺組織、回腸組織,胰腺組織HE染色后觀察組織形態(tài),回腸組織電鏡下觀察腸上皮超微結(jié)構(gòu)變化,采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELSIA)檢測血清IL-6水平,采用鱟試劑法(LAL)檢測血清內(nèi)毒素水平,應(yīng)用PCR檢測各組織細(xì)菌DNA片段,應(yīng)用免疫組化測定腸上皮Clau
3、dins蛋白表達(dá)。
結(jié)果:對照組胰腺組織未見出血、壞死,實(shí)驗組3h與對照組無明顯變化,實(shí)驗組其他時間點(diǎn)可見胰腺組織不同程度的胰腺組織破壞并出血、壞死,48h時改變最顯著;對照組電鏡下腸上皮超微結(jié)構(gòu)未見異常,實(shí)驗組3h時無明顯改變,實(shí)驗組其他時間點(diǎn)可見腸上皮斷裂并脫落,細(xì)胞間隙增寬,48h時改變最明顯。ELSIA法示對照組與實(shí)驗組血清IL-6水平分別為0.312±0.030、0.326±0.037、0.337±0.016、0.3
4、59±0.022、0.378±0.036,3、12、24、48h與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05); LAL法示對照組與實(shí)驗組血清內(nèi)毒素水平分別為0.028±0.004、0.155±0.014、0.274±0.020、0.352±0.017、0.490±0.0523,各實(shí)驗組與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);實(shí)驗組各時間點(diǎn)各組織中細(xì)菌易位率示實(shí)驗組3h與對照組比較無明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P=0.074,P>0.05),實(shí)驗組12
5、h、24h、48h與對照組比較具有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);免疫組化法示對照組Claudins蛋白均勻的分布在腸上皮細(xì)胞連接的頂端;實(shí)驗組分布不均勻,Claudins蛋白表達(dá)隨時間點(diǎn)推移表達(dá)逐漸降低,于48h時表達(dá)最低。對照組與實(shí)驗組平均光密度值分別為0.3578±0.0021、0.3531±0.0020、0.3513±0.0018、0.3492±0.0016、0.3185±0.0023,3h時與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)
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