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文檔簡介
1、目的:培養(yǎng)、純化以獲得較高純度的大鼠少突膠質前體細胞(02A),觀察各個時期細胞的形態(tài)學變化;在模擬缺氧條件下培養(yǎng)不同的時間,觀察02A在缺氧條件下的形態(tài)學變化,采用免疫組化和Western blot等技術,測定各個缺氧時間段Tau蛋白的強度,探索缺氧對02A Tau蛋白的影響。 方法:采用兩次恒溫搖床振蕩培養(yǎng)法培養(yǎng)、純化02A,A285免疫熒光染色法進行細胞鑒定,倒置熒光顯微鏡拍照,并觀察計算細胞純度。以低糖缺氧環(huán)境模擬體內缺
2、氧缺血狀態(tài),建立大鼠02A體外缺氧模型,觀察02A在各個時間點的形態(tài)學變化,并開展Western blot和免疫組化實驗,利用激光共聚焦顯微鏡測定熒光強度,反映Tau蛋白量的變化。 結果:純化后02A細胞胞體呈圓形,有單極或雙極突起,形成克隆球,A285標記陽性,免疫熒光鑒定細胞純度可達85%以上。隨著暴露在低糖缺氧環(huán)境中時間的延長,02A細胞數(shù)量逐漸減少,突起逐漸縮短,免疫熒光強度和灰度值均逐漸減弱,Tau蛋白量呈減少趨勢。
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