1、復方烏梅是一種防治水產(chǎn)動物細菌性疾病的漁用中藥復方，主味藥是烏梅。復方中含有有蘋果酸、檸檬酸、沒食子酸和黃酮類等成分，具有抗菌、解毒、收斂止血和祛腐生新的作用。目前，中藥復方已廣泛應用于水產(chǎn)動物病害的防治，但關于中藥復方在水產(chǎn)動物體內(nèi)的藥物代謝過程及其藥效作用機理研究尚不明確，因此，對于復方的代謝規(guī)律，作用機理研究尤其重要。 復方烏梅為體外抑菌效果較強的中藥組方。本試驗通過復方烏梅超聲提取方法及高效液相有效成分含量測定的方法，獲

2、得了復方烏梅的最佳提取工藝及同時測定復方烏梅中四種有效成分的含量的高效液相色譜法；通過測定攻毒給藥后鯽魚體內(nèi)血液生理生化指標的測定，分析了復方烏梅對鯽魚肝功能及抗氧化機能的影響，研究了復方烏梅在鯽魚體內(nèi)的藥物代謝過程，及口服藥物生物利用度，為認識復方烏梅的代謝規(guī)律、在機體內(nèi)的作用機理，給藥途徑及劑量提供了寶貴的參考數(shù)據(jù)。 1、復方烏梅的藥代動力學研究 1.1復方烏梅超聲提取法的工藝研究 采用L9(33)正交試驗，

3、以總有機酸、總黃酮為檢測指標，建立了復方烏梅超聲提取的最佳工藝條件。復方烏梅的最佳提取條件為A2B2C2，即在60℃下加20倍量的水提取3次，每次提取時間為20分鐘。試驗測得復方烏梅總有機酸與總黃酮含量分別為19.14％和27.56‰。 1.2 HPLC測定復方烏梅有效成份含量測定 采用HPLC法，以磷酸水溶液(pH 2.55)與乙腈為流動相，采用線性梯度洗脫，0～20 min，5％～15％，檢測波長215nm；20～6

4、0 min，15％～45％，檢測波長280mim：流速為0.6mL/min的色譜條件下各種有效成分不僅能較好的分離，且峰形較好。結(jié)果顯示：復方烏梅中的蘋果酸含量為31.93‰，檸檬酸含量為86.39‰，沒食子酸含量為6.60‰，黃芩苷的含量為7.61‰。首次建立了同時測定復方烏梅中四種有效成分含量的方法，為復方烏梅質(zhì)量控制及其作用機理的研究提供了寶貴的基礎數(shù)據(jù)。試驗證實，該法快速簡便，穩(wěn)定可靠，專屬性強。 1.3復方烏梅在鯽魚

5、體內(nèi)的藥代動力學研究 通過對鯽魚口灌與注射給藥，以沒食子酸為目標藥物，運用高效液相色譜法(HPLC)檢測復方烏梅在鯽魚血液及肝腎組織中的濃度變化，獲得了鯽魚對復方烏梅的吸收、分布與消除數(shù)據(jù)。結(jié)果表明，復方烏梅在魚體血液內(nèi)的藥時數(shù)據(jù)符合開放式一室模型，口灌，靜脈注射給藥后血液藥物代謝動力學方程分別為C=15.1413e-0.0744t，C=21.82446e-0.1732t?？诠嘟M吸收半衰期t1/2Ka與消除半衰期t1/2Ka分別

6、為0.637h，4.001h，最大血藥濃度Cmax分別為12.956μg/ml,；注射組消除半衰期t1/2Ke為9.311h，最大血藥濃度Cmax12.956μg/mL，22.200μg/mL；藥時曲線下面積AIJCo‐∞別為105.915mg/L*h，203.395mg/L*h?？诜头綖趺窙]食子酸在體內(nèi)的絕對生物利用度F=52.074％?？诠嘟M復方烏梅在肝腎內(nèi)的藥時數(shù)據(jù)符合二室模型，藥代動力學方程分別為C=15.9057e-0.29

7、94t+2.4192e-0.0214t，C=13.334e-0.2676t+3.6237e-0.0078t。最大藥物濃度Cmax分別為15.222μg/g，16.38μg/g。肝腎消除半衰期t1/2Ke。分別為32.44Oh及99.801.h。 2、復方烏梅藥效學研究 2.1復方烏梅的體外抑菌效果及急性毒性試驗 采用藥敏試驗，進行了復方烏梅體外抑菌試驗，采用試管兩倍稀釋法，測定了復方烏梅超聲提取液對魚類細菌性疾病

8、三種常見致病菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)，及對鯽魚的急性毒性試驗。結(jié)果表明，復方烏梅超聲提取液對溫和氣單胞菌(Aeromonas sobria)、遲緩愛德華菌(Edwardsieda torda)和魯克耶爾森氏菌(Yersina nuckeri j)的最小抑菌濃度分別為3.125m/ml、0.781mg/ml、0.781mg/ml，最小殺菌濃度分別為12.500mmg/ml、3.125mg/ml、1.563mg/m

9、l；復方烏梅對鯽魚的48 h半致死濃度為625mg/kg,安全濃度為62.5mg/kg。 2.2復方烏梅藥效學研究 采用人工體內(nèi)攻毒的方法，通過測定鯽魚生理生化指標、抗氧化指標、攻毒死亡率及藥物保護率，反應復方烏梅在鯽魚體內(nèi)的防治效果。結(jié)果表明，復方烏梅能有效的降低血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)和總膽紅素含量，有保護肝細胞，增強肝功能恢復作用；能有效的清除體內(nèi)自由基，增加超氧化物歧化酶活力，保護細胞免受