1、萘酰亞胺類DNA嵌入劑作為抗癌試劑已經取得了巨大的進展，如氨萘非特（amonafide）和米托萘胺（mitonafide）已經進入到了Ⅱ期臨床實驗。但是這類化合物存在著諸多不足，如具有神經毒性，腫瘤特異性差等。由于此類化合物以DNA為作用靶點，因此應該設法提高它對DNA的結合能力，以提高其細胞毒作用和抗腫瘤活性。 大連理工大學精細化工國家重點實驗室采用烷基異硫脲陽離子作為連接基對稱性地連接兩個萘酰亞胺形成DNA雙嵌入劑，利用烷基

2、異硫脲陽離子與萘酰亞胺母體環(huán)的協(xié)同效應，設計合成了dNIT系列和sNIT系列新型萘酰亞胺類化合物，使其具有更強的DNA結合能力。 本研究首先以宮頸癌Hela細胞，人神經膠質瘤U251細胞，人肝癌SMMC—7721細胞和人乳腺癌MCF—7細胞四種腫瘤細胞系為體外模型，通過MTT法檢測了dNIT系列和sNIT系列化合物的細胞毒性。結果顯示，雙萘酰亞胺類化合物比單萘酰亞胺類化合物具有更強的細胞毒性，而細胞毒性強弱與連接臂長度無相關性。

3、IC50結果顯示，dNIT系列對不同組織的腫瘤細胞具有特異性，但這種特異性也與連接臂長度無關。其中，dNIT—6對MCF—7細胞作用12、18和24h的IC50值分別為9.93±1.03、8.72±1.22和6.92±1.56μmol/L，dNIT—2對SMMC—7721細胞作用12、18和24h的IC50值分別為12.76±1.19、10.16±1.31和7.75±1.43μmol/L，IC50值較小，特異性較強，因此選擇dNIT—6

4、和dNIT—2討誘導腫瘤細胞凋亡的作用通路。 dNIT—6作用于人乳腺癌MCF—7細胞12h，通過顯微鏡觀察細胞生長，PI單染檢測細胞周期分布，AV/PI雙染檢測細胞凋亡，流式細胞術檢測P53和Bcl—2蛋白活性，分光光度法檢測caspase—9和caspase—3活性。結果表明，dNIT—6以濃度依賴性方式誘導MCF—7細胞凋亡，并造成細胞周期阻滯于G0/G1期。dNIT—6能夠激活P53，抑制Bcl—2，進而激活caspa

5、se—9、caspase—3，引發(fā)凋亡級聯(lián)反應，最終導致細胞凋亡。 dNIT—2作用于人肝癌SMMC—7721細胞12h，通過顯微鏡觀察細胞生長，PI單染檢測細胞周期分布，AV/PI雙染檢測細胞凋亡，流式細胞術檢測P53和Bcl—2蛋白活性，羅丹明123染色檢測線粒體膜電位變化，分光光度法檢測caspase—9和caspase—3活性。結果表明，dNIT—2以濃度依賴性方式誘導SMMC—7721細胞凋亡，并造成細胞周期阻滯于S

6、期。dNIT—2能夠激活了P53，破壞線粒體膜電位，抑制Bcl—2，進而激活caspase—9、caspase—3，引發(fā)凋亡級聯(lián)反應，最終導致細胞經由線粒體途徑凋亡。 研究結果表明，dNIT—6和dNIT—2對腫瘤細胞具有很強的毒性作用，它們對腫瘤細胞的凋亡誘導作用都與P53激活和Bcl—2抑制有關，但是對于不同腫瘤細胞，它們引起凋亡的機制不完全相同，這與所研究的細胞株不同有直接關系。本實驗為深入了解萘酰亞胺類的毒性作用機理打下