1、穿心蓮內(nèi)酯(Andrographolide,Andro)是爵床科穿心蓮屬植物(Andrographis paniculata (Burm.f.)Nees)穿心蓮提取物中的主要有效成分之一。作為天然植物藥穿心蓮在亞洲及南美一些國家用于炎癥的治療已經(jīng)有上千年的歷史，近來在對炎癥的研究中，已有文獻報道，Andro可以通過與NF-κB p50亞基的62位還原態(tài)半胱氨酸共價結(jié)合使其不能在細胞核內(nèi)與DNA結(jié)合而起到阻抑NF-κB信號激活的作用。近年

2、來的研究還表明，在多種腫瘤細胞中，NF-κB啟動后，腫瘤相關因子如Bcl-Xl,c-FLIP,VEGF,MMP9等會高表達，使正常細胞的“凋亡的腫瘤監(jiān)視功能”失調(diào)，并通過抗凋亡，促新生血管生成及促進浸潤等過程而起到促進腫瘤發(fā)生發(fā)展的作用(17)。因此在腫瘤中NF-κB信號發(fā)揮著促進增殖、抑制凋亡而起著抗腫瘤的作用。而炎癥與腫瘤有著密切的關系，那么 Andro在炎癥中是通過NF-κB起作用的，NF-κB又在腫瘤中起著重要的作用，那么And

3、ro在腫瘤中的作用是否也與NF-κB信號有關呢？但Andro是否能夠靶向NF-κB信號發(fā)揮抗腫瘤作用的研究目前尚未見報道。本課題采用基因工程小鼠(Rip1-tag2鼠)的自發(fā)胰腺瘤和B16黑色素皮下移植瘤為腫瘤研究模型，Andro腹腔治療和已上市Andro滴丸的灌胃治療為治療方式，以及構建B16/p50siRNA穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株和B16/IκBα的穩(wěn)定細胞株，檢測細胞株的體內(nèi)成瘤情況，研究Andro是否對腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移有抑制作用，以及A

4、ndro對腫瘤的抑制是否靶向NF-κB信號通路而發(fā)揮作用的。
　　 方法：
　　 1.Andro對腫瘤生長的作用建立Rip1-Tag2小鼠的胰島β細胞瘤自發(fā)生長模型。Andro治療(腹腔治療5ug/g)為實驗組，而無效對照藥物4H-andro治療(腹腔治療5ug/g)為對照組通過計數(shù)血性胰島、胰島β細胞瘤數(shù)目，以及測量腫瘤的體積，探討Andro在自發(fā)腫瘤中的作用。并用免疫組化技術檢測腫瘤細胞中與腫瘤增殖、凋亡相關的標記性

5、分子如Brdu、Tunel等，分析Andro對腫瘤增殖、凋亡的影響。
　　 采用C57小鼠，皮下接種B16黑色素瘤細胞，建立皮下移植瘤模型，用Andro治療(腹腔治療5ug/g)和對照藥物4H-andro(腹腔治療5ug/g)治療，通過測量腫瘤體積和免疫組化技術檢測腫瘤細胞中與腫瘤增殖、凋亡相關的標記性分子如Brdu、Tunel等，分析Andro對腫瘤增殖、凋亡的影響。
　　 2.Andro滴丸對腫瘤生長的作用采用C57

6、小鼠，皮下接種B16黑色素瘤細胞，建立皮下移植瘤模型，用Andro滴丸治療(灌胃治療0.143ug/20g)和對照藥物4H-andro(灌胃治療0.143ug/20g)治療，通過腫瘤體積、小鼠生存率、腫瘤重量，分析Andro滴丸對腫瘤發(fā)生發(fā)展的影響。
　　 3.Andro對腫瘤轉(zhuǎn)移的作用給C57小鼠尾靜脈注射B16黑色素瘤細胞，建立轉(zhuǎn)移瘤模型，用Andro治療(腹腔治療5ug/g)和對照藥物4H-andro(腹腔治療5ug/g)

7、治療通過記錄轉(zhuǎn)移到肺的腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目，觀察Andro對皮下移植瘤肺轉(zhuǎn)移的作用。
　　 4.Andro對B16黑色素瘤細胞中NF-κB信號的作用利用B16黑色素瘤細胞系，構建B16/p50siRNA和B16/IκBα的穩(wěn)轉(zhuǎn)細胞株，分別用Andro(30umol)做為實驗組，4H-andro(30umol)為對照組，檢測細胞增殖的作用和觀察不同細胞株在體內(nèi)成瘤的的作用。
　　 結(jié)果：
　　 1.建立的Rip1-Tag2

8、小鼠的胰島β細胞瘤自發(fā)生長模型和皮下移植瘤模型，Andro治療的小鼠的腫瘤體積和腫瘤數(shù)目明顯小于4H-andro處理的。且免疫組化結(jié)果顯示Andro處理的腫瘤組織細胞中Brdu增殖數(shù)目明顯少于4H-andro處理的，同時凋亡細胞數(shù)明顯增多。
　　 2.Andro滴丸處理的皮下植瘤模型結(jié)果顯示Andro治療的小鼠腫瘤體積和腫瘤重量明顯小于4H-andro處理的，生存期也明顯延長。
　　 3.皮下移植瘤肺轉(zhuǎn)移瘤模型結(jié)果表明A