1、目的:
　　 牙周炎是累及牙周支持組織的炎癥性、破壞性疾病，主要臨床表現(xiàn)有牙周袋形成，牙周附著喪失和牙槽骨吸收。牙周炎的患病率及嚴重程度隨年齡增高而增加?？谇涣餍胁W調查結果顯示，牙周炎已成為我國成年人牙齒喪失的首位原因，嚴重影響患者的咀嚼功能和牙周美觀。醫(yī)學研究表明牙周炎與多種全身性疾病相互關聯(lián)，牙周炎對血脂、血糖水平的影響可能是增加心血管疾病、糖尿病等系統(tǒng)疾病發(fā)病機率的重要原因[1]。在牙周炎的臨床治療方面，傳統(tǒng)的局部、全身

2、藥物及牙周基礎治療可以控制牙齦炎癥，改善牙周狀態(tài)，但對于牙周組織的重建收效甚微，因此，如何使已破壞和喪失的牙周組織修復和再生，恢復牙周的美觀外形和正常的咀嚼功能成為臨床上亟需解決的問題。牙周組織工程技術的出現(xiàn)為實現(xiàn)牙周組織的修復再生提供了全新的思路。
　　 牙周組織工程是利用生命科學和生物材料學的原理、方法和技術重建新的具備原有形態(tài)和功能的牙周組織，達到修復和再生的目的，其包含種子細胞、支架材料與生長因子三大基本要素。本研究選用

3、中藥雙黃補作為生長因子，將牙齦成纖維細胞作為種子細胞與玉米醇溶蛋白支架材料結合，應用于動物人工骨缺損模型中，觀察牙齦成纖維細胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補復合體在牙周組織工程應用中對牙周組織修復的影響，研究其促進牙周組織再生的病理生理機制，為中藥在牙周組織工程的開發(fā)和應用提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 以2只Beagle犬雙側上頜54(⊥)45、下頜743(⊥)347共20個牙位作為實驗部位，將其配對分為四組，每組5個牙位

4、分別制備骨缺損模型，實驗組Ⅰ:翻瓣術+玉米醇溶蛋白支架植入，實驗組Ⅱ:翻瓣術+牙齦成纖維細胞-玉米醇溶蛋白支架植入，實驗組Ⅲ:翻瓣術+牙齦成纖維細胞-玉米醇溶蛋白-中藥雙黃補復合體植入，對照組:單純翻瓣術。于術后3個月獲取標本，根據(jù)錐形束CT檢查、組織學測量指標（骨缺損高度、新生牙槽骨高度、新生牙骨質高度、結合上皮長度）以及免疫組化染色半定量分析骨形成蛋白-2(Bonemorphogeneticproteins-2，BMP-2)及骨唾液

5、蛋白(Bonesialoprotein，BSP)的表達，研究牙齦成纖維細胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補復合體促進牙周組織再生的作用和機制。
　　 結果:
　　 1.組織學觀察
　　 術后3個月光學顯微鏡下觀察，實驗組Ⅰ、Ⅱ及對照組牙齦區(qū)及牙周膜均可見炎細胞浸潤，實驗組Ⅲ未見明顯炎癥細胞;實驗組Ⅰ骨缺損區(qū)顯示新骨及牙骨質生成，骨小梁纖細，圍繞大量的纖維組織;實驗組Ⅱ可見片狀新骨結構，骨缺損邊緣成骨細胞成行排列，牙周膜內新

6、生血管數(shù)目較多;實驗組Ⅲ顯示大量漸趨成熟的新骨組織，可見哈弗氏系統(tǒng);對照組缺損區(qū)以纖維化骨為主，可見成骨細胞及成牙骨質細胞。四組均有明顯結合上皮根移。
　　 2.組織學測量結果
　　 實驗組Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ術后3個月新生牙槽骨分別為1.02±0.09mm、1.03±0.06mm和1.14±0.07mm，均高于對照組新生牙槽骨高度測量值0.96±0.06mm(P＜0.05)，其中實驗組Ⅲ新骨生成效果更顯著(P＜0.01)。實驗組

7、Ⅲ新生牙骨質高度為1.00±0.08mm，高于對照組新生牙骨質高度測量值0.91±0.10mm(P＜0.05);而術后四組的結合上皮長度值差異無顯著性意義(P＞0.05）。
　　 3.錐形束CT檢查
　　 錐形束CT檢查實驗組Ⅰ骨缺損區(qū)有新骨形成，邊緣模糊，與周圍骨組織逐漸融合;實驗組Ⅱ顯示骨缺損區(qū)可見點片狀密度較高的影像;實驗組Ⅲ顯示骨缺損區(qū)大量新骨生成，缺損邊緣皮質骨連續(xù)，呈現(xiàn)明顯的阻射影;對照組骨缺損區(qū)面積縮小，低

8、密度影較各實驗組多。實驗組成骨較對照組多，且實驗組Ⅲ較實驗組Ⅰ、Ⅱ高密度影增多。
　　 4.牙槽骨骨密度測量結果
　　 實驗組Ⅱ、Ⅲ牙槽骨骨密度的差值百分比低于對照組的骨密度差值百分比(P＜0.05），且實驗組Ⅲ的骨密度的差值百分比低于實驗組Ⅱ對應值(P＜0.05），而實驗組Ⅰ與對照組的差值百分比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05）。
　　 5.免疫組化結果
　　 骨形成蛋白-2陽性表達定位于胞漿，以胞漿中出

9、現(xiàn)棕黃色顆?；驁F塊者為陽性細胞。四組中骨形成蛋白-2均有陽性表達，新生牙槽骨周圍可見成骨細胞陽性著色，新生牙骨質邊緣的成牙骨質細胞也為陽性著色;實驗組Ⅱ、Ⅲ的BMP-2表達為中度陽性，明顯高于對照組弱陽性(P＜0.05），實驗組Ⅰ的BMP-2陽性細胞數(shù)略高于對照組，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 骨唾液蛋白陽性表達于胞漿，呈棕黃色著色。四組中骨唾液蛋白均有陽性表達，成牙骨質細胞、成骨細胞胞漿中可見棕黃色顆?；驁F塊。與空

10、白對照組相比，實驗組Ⅱ、Ⅲ的骨唾液蛋白中度陽性表達，陽性細胞數(shù)明顯增高(P＜0.05），實驗組Ⅰ與對照組均為弱陽性，陽性細胞數(shù)比較無顯著性差異(P＞0.05）。
　　 結論:
　　 1.牙齦成纖維細胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補復合體可能通過促進牙齦成纖維細胞增殖繼而向成骨細胞分化，加快骨基質的形成和成熟，從而促進牙周組織的再生。
　　 2.牙齦成纖維細胞-玉米醇溶蛋白-雙黃補復合體能促進BMP-2和BSP在牙周組織中