1、中山大學(xué)碩士學(xué)位論文氯喹增強拓撲替康體外抑瘤的分子機制探討姓名：王堯申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：張曉實20100527中山大學(xué)碩士學(xué)位論文 氯喹增強拓撲替康體外抑瘤的分子機制探討治療小鼠黑色素瘤能夠增強放療所誘導(dǎo)的細胞死亡。因此，氯喹被認為具有直接的細胞毒性作用，或能夠間接的增強放、化療的敏感性。后續(xù)的研究表明在不同的腫瘤細胞如：乳腺癌、肺癌、結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤等當中，氯喹均具有直接細胞毒性作用。近來，一

2、項隨機、雙盲、安慰劑對照的臨床研究表明，氯喹聯(lián)合應(yīng)用傳統(tǒng)的放療及化療能夠有效延長多形性惡性膠質(zhì)瘤的中位生存時間。到目前為止，有十幾個不同的關(guān)于C Q 增敏放、化療的臨床試驗正在進行當中。對于C Q 的抗腫瘤機制或許有以下可能，首先C Q 有可能會影響耐藥蛋白( A T P - b i n d i n g c a s s e t t es u p e r f a m i l yG m e m b e r 2 ，A B C G 2 ) ，它

3、能夠通過提高進入細胞的藥物濃度，促進化療藥物的殺傷作用；其次，C Q 有可能通過改變?nèi)苊阁w膜的通透性( L y s o s o m a l m e m b r a n ep e r m e a b i l i z a t i o n ，L M P ) ，從而促進腫瘤細胞的死亡；另外，作為一種自噬抑制劑，C Q 通過改變?nèi)苊阁w內(nèi)的P H 值來破環(huán)自噬溶酶體對于蛋白質(zhì)的降解，造成L C ．I I 的不斷聚集，從而阻斷了自噬的最后一步；C Q

4、 也能夠通過直接作用于D N A 來殺傷腫瘤細胞，這種殺傷作用依賴于其作用的濃度與時間。基于C Q 的多種抗腫瘤機制，本實驗當中，將觀察C Q 與化療藥物T P T 聯(lián)用對于腫瘤細胞增殖抑制的影響，并初步探討其可能機制。方法：應(yīng)用M T T 法檢測T P T 對肺癌細胞A 5 4 9 和結(jié)腸癌細胞S W 4 8 0 、S W 6 2 0 、C o l 0 2 0 5 、L o V o 的增殖抑制作用，以及C Q 和T P T 聯(lián)合應(yīng)用時

5、對A 5 4 9 和L o V o細胞的增殖抑制作用；共聚焦顯微鏡下觀察胞質(zhì)內(nèi)Y F P ．L C 3 的點狀聚集及A O染色的酸性小體；采用s h R N A 沉默A t 9 5 后應(yīng)用T P T 處理，M T T 法檢測對A 5 4 9的生長抑制，采用s i R N A 沉默B e c l i n l 后應(yīng)用T P T ，臺盼藍染色法計數(shù)L o V o 細胞死亡率。通過流式細胞儀檢測C Q 和T P T 聯(lián)用對于A 5 4 9 細胞