1、磺脲類藥物屬于胰島素促泌劑，它們在臨床上廣泛用于治療2 型糖尿病。但是，隨著治療時間延長，臨床上出現(xiàn)藥物繼發(fā)性失效現(xiàn)象。有研究顯示，某些胰島素促泌劑（如格列本脲）可誘導胰島β細胞發(fā)生氧化應激，產(chǎn)生ROS，進而誘導細胞凋亡。但是，目前尚不明了這些促泌劑通過何種機制損害β細胞，也不清楚是否所有的胰島素促泌劑都有類似的作用。而ARB 有保護β細胞功能的作用。 本研究選擇甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列奇特藥物和替米沙坦分別從細胞活力、細胞內(nèi)

2、ROS 生成和細胞凋亡三個方面探討胰島素促泌劑對β細胞的影響及其機制。 一．甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列奇特對MIN6 細胞的影響 目的：研究不同磺脲類藥物對胰島分泌細胞的影響及機制。 方法：不同濃度甲苯磺丁脲、格列吡嗪和格列奇特干預MIN6 細胞一定時間后，MTT 法檢測細胞活力變化，運用ROS 捕獲劑雙氫溴乙啶（HE）、雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃（DCFH-DA）和雙氫羅丹明123（DHR123）孵育細胞，同過熒

3、光顯微鏡觀察細胞內(nèi)熒光、流式細胞儀檢測MIN6 細胞的MFI 而測得細胞內(nèi)ROS 水平。用Annexin-vFITC和PI 雙標記細胞凋亡檢測法通過流式細胞儀測定藥物誘導細胞凋亡情況。 結果：甲苯磺丁脲和格列吡嗪干預MIN6 細胞后，細胞活力明顯被抑制（P<0.05）；細胞內(nèi)的MFI 明顯增加；細胞凋亡率明顯增加；而且，細胞活力下降、MFI和細胞凋亡率與藥物作用濃度和時間呈正相關。而格列奇特干預MIN6 細胞后，細胞活力無明顯被

4、抑制（P>0.05）；細胞內(nèi)的MFI 無明顯增加；細胞凋亡率無明顯增加。 結論：甲苯磺丁脲和格列吡嗪可誘導MIN6 細胞發(fā)生氧化應激，誘導MIN6 細胞凋亡，它們對細胞損傷作用可能與氧自由基生成過多、ROS 蓄積有關。格列奇特不能誘導MIN6 細胞發(fā)生氧化應激，不能誘導MIN6 細胞凋亡，這可能與它具有抗氧化劑作用有關。說明并非所有磺脲類藥物對β細胞有損害作用。 二．替米沙坦對MIN6 細胞的影響 目的：研究血管

5、經(jīng)張素II 受體1 拮抗劑（ARB）藥物對胰島分泌細胞的影響及機制。 方法：不同濃度替米沙坦及替米沙坦和甲苯磺丁脲共同干預MIN6 細胞一定時間后，MTT 法檢測細胞活力變化，運用ROS 捕獲劑雙氫溴乙啶（HE）、雙氫-乙酰乙酸二氯熒光黃（DCFH-DA）和雙氫羅丹明123（DHR123）孵育細胞，同過熒光顯微鏡觀察細胞內(nèi)熒光、流式細胞儀檢測MIN6 細胞的MFI 而測得細胞內(nèi)ROS 水平。用Annexin-vFITC和PI 雙

6、標記細胞凋亡檢測法通過流式細胞儀測定藥物誘導細胞凋亡情況。 結果：替米沙坦單獨干預MIN6 細胞后，細胞活力無明顯被抑制；細胞內(nèi)的MFI 無明顯增加；細胞凋亡率無明顯增加；而替米沙坦和甲苯磺丁脲共同孵育MIN6 細胞后，細胞活力相對甲苯磺丁脲單獨干預MIN6 增強（P>0.05）；細胞內(nèi)的MFI 明顯減少；細胞凋亡率明顯減少。 結論：替米沙坦對MIN6 細胞氧化應激有保護作用，不誘導MIN6細胞凋亡，ARB 能保護胰島β