1、背景:神經干細胞的發(fā)現(xiàn)，更新了以往認為神經元不能再生的傳統(tǒng)觀點，使人們對神經系統(tǒng)的結構和功能有了一個全新的認識，并且也為臨床對腦和脊髓外傷、以及其他神經系統(tǒng)疾患提供了一個新的有效治療途徑，但因其不易獲得且存在倫理學問題，實用性受到很大限制。脂肪來源的多能干細胞(簡稱ADSCs)具有來源豐富、采集方便、體外擴增快和自體移植等特點，預示了此種來源的干細胞在I臨床細胞移植治療上將具有很大的優(yōu)勢。有研究報道，脂肪干細胞可在體外誘導分化為神經元樣

2、細胞，移植入缺血腦組織后可通過分化為神經元等細胞和分泌神經保護性生物因子等途徑而達到修復作用。 目的:研究ADSCs在一定的培養(yǎng)條件下可被誘導成神經干細胞并進一步分化成神經元樣細胞，并表達神經干細胞特異性標記物Nestin和神經元特異性標記物NSE。探索使用超順磁性納米氧化鐵顆粒(SPIO)和多聚左旋賴氨酸(PLL)復合物對脂肪干細胞進行磁性標記和MRI用于示蹤磁性標記ADSCs的可行性，探索腦缺血損傷后脂肪干細胞移植治療腦組織

3、損傷的作用機制。 方法:Sprague-Dawley大鼠(鼠齡2～4個月)過量麻醉處死，無菌條件下取出腹股溝脂肪組織，使用膠原酶I消化，分離、培養(yǎng)得到ADSCs，取培養(yǎng)的第三代ADSCs使用神經干細胞培養(yǎng)基誘導分化，檢測誘導后的ADSCs表達神經干細胞標志物和ADSCs分化后表達神經元特異性標志物的情況；同樣取第三代ADSCs在體外使用SPIO-PLL復合物行磁性標記，臺盼蘭拒染試驗判斷磁性標記對ADSCs的活性有無影響，普魯士

4、藍染色和體外MRI判斷ADSCs磁性標記的有效性；36只缺血造模成功的Sprague-Dawley大鼠分成缺血對照組、PBS治療組和磁性標記ADSCs治療組，每組12只。造模后3天，采用立體定向儀進行細胞移植，移植位點：皮質(前囟后3mm，旁開3mm，深4mm)，垂直距離以顱骨外板為標準。SPIO標記組大鼠在ADSCs腦內移植后當天和第3周進行磁共振動態(tài)觀察。采用改良神經損害嚴重程度評分(改良NSS評分)對ADSCs移植后各組動物進行神

5、經系統(tǒng)行為和運動功能評估。移植后21天處死所有大鼠取下腦組織固定行神經元特異性稀醇化酶(NSE)、CD31免疫組化染色和普魯士藍染色。采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件，所有數據均以均數±標準差表示，采用t檢驗，以P＜0.05表示差異具有顯著性。 結果: 1)由脂肪組織來源的多能干細胞可在體外培養(yǎng)并穩(wěn)定增殖，ADSCs經免疫熒光染色，絕大多數細胞呈CD44陽性。 2)第3代的ADSCs在誘導培養(yǎng)基作用下可被誘導為神經干

6、細胞樣生長的細胞團，神經干細胞標記物nestin免疫組化染色陽性，經誘導分化后表達神經元標記物NSE。 3)傳代至第3代的ADSCs體外行SPIO+PLL復合物標記后進行Prussian Blue染色，幾乎所有的磁性標記ADSCs胞質內均可見多少不等的藍染鐵顆粒，標記率為100％，而未經PLL修飾的SPIO標記ADSCs，僅少數細胞胞質內見藍染的鐵顆粒；各時相點磁標記細胞的Typan Blue拒染率與未標記細胞間無統(tǒng)計學意義。體

7、外MR成像時，SPIO-PLL標記的ADSCs于T2WI上可使MR信號明顯減低。 4)將SPIO-PLL標記和未標記的ADSCs移植到正常的SD大鼠雙側大腦實質中，1周后使用1.5TMR掃描儀檢查，見磁性標記ADSCs移植處在T2WI和T2*WI序列均呈低信號改變，其中以T2*WI序列最為敏感，而未標記ADSCs移植處未見低信號改變。 5)在ADSCs腦內移植后進行磁共振動態(tài)觀察發(fā)現(xiàn)，損傷對側腦內移植的磁性標記ADSCs

8、可通過胼胝體遷移至缺血性腦損傷灶周圍。腦組織NSE、CD31免疫組化染色顯示部分ADSCs陽性，與MR示蹤成像上所顯示的低信號區(qū)相對應部腦組織普魯士藍染色可見染色陽性的移植細胞。 6)NSS評分顯示ADSCs移植組大鼠神經系統(tǒng)行為和運動功能改善較對照組大鼠明顯。 結論:ADSCs可在體外一定的誘導條件下誘導成nestin表達陽性的神經干細胞樣生長的細胞團，且可進一步分化成神經元樣細胞。SPIO-PLL復合物可安全有效地標