1、本項研究目的是探討綠膿桿菌及其分泌的小分子產(chǎn)物綠膿菌素對呼吸道上皮細胞IL-8表達的影響及其胞內(nèi)信號傳導通路.首先,我們使用綠膿桿菌培養(yǎng)上清刺激原代培養(yǎng)氣管上皮細胞及呼吸道上皮細胞株A549和SPC-A-1,均檢測到IL-8的分泌顯著增高;用氯仿抽提去除培養(yǎng)上清的綠膿菌素后,再用分子截留量為3kD的濾膜過濾所得的超濾液刺激上皮細胞發(fā)現(xiàn)有新的未知小分子物質(zhì)也可誘導細胞IL-8的上調(diào)表達.綠膿菌素是綠膿桿菌分泌的一類重要毒力因子.從化合物衍

2、生的和培養(yǎng)上清提取的綠膿菌素刺激原代培養(yǎng)氣管上皮細胞對IL-8的表達沒有顯著影響,刺激A549和SPC-A-1細胞則可誘導IL-8的增強表達.其次,實驗發(fā)現(xiàn),用綠膿菌素刺激細胞后,MAPK及NF-κB這兩條通路同時被激活.我們使用Western Blot方法觀察綠膿菌素刺激呼吸道上皮細胞后胞內(nèi)MAPK通路的信號分子的動態(tài)變化,提供了綠膿菌素可刺激細胞內(nèi)MAPKs蛋白分子ERK1/2、p38 MAPK和JNK發(fā)生磷酸化的直接證據(jù),并通過使

3、用MAPKs抑制劑U0126和SB203580,證實MAPKs信號傳導通路參與了綠膿菌素誘導呼吸道上皮細胞IL-8的表達.對NF-κB信號通路的重要分子lkB-α的研究,首次發(fā)現(xiàn)綠膿菌素可使IκB-α發(fā)生降解.使用酪氨酸蛋白激酶抑制劑genistein預處理A549細胞,也可降低綠膿菌素誘導的IL-8表達.由于Toll樣受體(TLRs)在調(diào)節(jié)機體免疫反應中具有重要的作用,我們進一步探討了TLR介導的信號通路與A549細胞IL-8刺激表達