1、內生真菌在植物抗生物和非生物脅迫中發(fā)揮著重要作用，土壤重金屬污染是我國最為嚴重的環(huán)境問題之一。本論文主要研究應用煙草內生真菌菌肥制劑降低煙草重金屬含量，主要內容包括:煙草內生真菌抗重金屬菌株固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化;內生真菌菌肥制劑對煙草重金屬含量的影響;煙草生產過程中，化學肥料對內生真菌菌肥制劑效果的影響;內生真菌菌肥制劑對煙草對黑脛病抗性的影響。
　　(1)內生真菌制劑對煙葉重金屬含量的影響盆栽試驗條件下，單一鎘(5mg/kg)脅迫

2、和砷(4mg/kg)、鎘(5mg/kg)、鉛(200mg/kg)三種重金屬混合脅迫，施有內生真菌菌肥制劑的處理不同程度上降低煙葉中重金屬含量。單一鎘脅迫時，YCEF005、YCEF053、YCEF191、YCEF193、NYN8C05、NYN8G01、NYN771C06七種菌肥制劑處理后煙草葉片中重金屬Cd分別降低了39.10％、35.65％、25.98％、25.88％、26.28％、18.83％、21.85％。砷、鎘、鉛混合脅迫中，七

3、種菌肥制劑處理后，煙葉中砷、鎘和鉛的含量都有降低，以YCEF005菌肥制劑降低砷含量最高，達36.07％;以YCEF191降低鎘的含量最大，達50.56％;以NYN771C06降低鉛的含量最大，達53.86％。
　　在大田小區(qū)試驗中，內生真菌制劑能降低煙葉中砷、鎘、鉛的含量。YCEF005、YCEF053兩種內生真菌制劑降低煙葉重金屬含量的效應優(yōu)于YCEF191、YCEF193。不同的地域制劑降低重金屬含量的程度不同，地域因素對內

4、生真菌制劑的鎘和鉛的效應有顯著影響，對砷的效應無顯著影響，基本表現(xiàn)為在土壤重金屬背景值大的地域，制劑降低重金屬含量的效果越顯著;葉位因素對內生真菌制劑的鉛的效應有顯著影響，對砷和鎘的效應無顯著影響;品種因素對內生真菌制劑對三種重金屬的效應無顯著影響。
　　(2)內生真菌制劑對煙草抗病性的影響YCEF005、YCEF053制劑處理的試驗組，在接種煙草疫霉后，煙草受害的嚴重程度顯著減輕，相對病情指數(shù)分別為0.81、0.75，誘導煙草對

5、煙草疫霉的抗性。
　　(3)優(yōu)化煙草抗重金屬內生真菌菌株固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基針對煙草內生真菌Fusarium sp.YCEF005和Pyrenochaeta sp.YCEF053，通過單因素試驗和正交試驗設計優(yōu)化固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基基質組成(w/w)，YCEF005:麩皮50％、豆餅粉10％、米糠20％、玉米碎粒20％; YCEF053:麩皮60％、豆餅粉10％、米糠10％、玉米碎粒20％。應用單因素試驗對發(fā)酵外加組分:碳源、氮源、磷酸鹽、金

6、屬離子進行初篩;應用均勻試驗設計的數(shù)據(jù)作為人工神經(jīng)網(wǎng)絡的訓練樣本，建立內生真菌固態(tài)發(fā)酵模型，利用遺傳算法優(yōu)化培養(yǎng)基組成得出最優(yōu)發(fā)酵外加組分和接種量（/kg)，YCEF005:蔗糖12.96g、蛋白胨12.70g、 NH4NO34.00g、KH2PO41.50g、 CaSO410.00g、 MgSO40.48g、含水量500g、接種量240mL。YCEF053:蔗糖13.37g、蛋白胨14.02g、 NaNO33.85g、KH2PO41.

7、23g、 CaSO410.89g、MgSO40.52g、含水量480g、接種量200mL。
　　(4)化學肥料對內生真菌菌劑效果的影響通過Plackett-Burman試驗設計，考察常用化肥對內生真菌制劑降低煙草重金屬含量的效果的影響。結果表明NH4NO3、 K2SO4、KNO3，NaNO3這四種肥料對YCEF005的效應有不同程度的抑制作用，依次為:NH4NO3＞KNO3＞K2SO4＞NaNO3;而H2NCONH2、KH2PO4