1、幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)與上消化道及胃腸道外的多系統(tǒng)疾病相關，但至今其感染人的傳染源和傳播途徑仍不明確。研究表明Hp可能是種食源性致病菌，而牛乳、羊乳是其中最可能的感染來源。目前，在幽門螺桿菌感染的眾多診斷方法中，聚合酶鏈式反應相關技術因靈敏度高，能檢出樣品中微量的Hp，而廣泛應用于各臨床樣品中Hp的檢測。本試驗分別以幽門螺桿菌16Sr RNA、UreA、glmM基因為靶基因，設計特異性引物，建立奶牛乳

2、樣和糞樣中幽門螺桿菌的PCR檢測方法，并成功應用于奶牛臨床樣品的檢測。
　　1、Hp PCR檢測方法的建立:根據(jù)NCBI上已公布的Hp16S rRNA、UreA、glmM基因序列，設計特異性引物。提取H pylori動物模型適應菌株SS1株菌液(1×108CFU/ML) DNA作為PCR模板。模板濃度、退火溫度、引物濃度及循環(huán)數(shù)等PCR反應體系及條件經(jīng)優(yōu)化后得到以下結果:25μL反應體系中，加入2μL模板DNA，16SrRNA、U

3、reA、glmM基因分別在退火溫度為58℃～60℃、48℃～50℃、58℃～60℃時能擴增出777bp、411bp、294bp的目的條帶;其中上下游引物(10μM)各0.4μL～0.6μL，循環(huán)數(shù)為32～35個時擴增效果最好。在此條件下，16S rRNA、UreA、glmM檢測的靈敏度分別為101 CFU/ML、103 CFU/ML、103 CFU/ML。同時對比乳樣、糞樣樣品基質(zhì)條件下PCR檢測靈敏度發(fā)現(xiàn)，應用UreA、glmM基因檢

4、測人工污染的奶牛糞樣中幽門螺桿菌時，靈敏性有所下降，為104 CFU/ML。由此可得，本試驗建立的PCR方法快速、特異、靈敏、高效，為檢測奶牛攜帶幽門螺桿菌的情況奠定了基礎。
　　2、Hp PCR檢測方法的應用:采集規(guī)?；B(yǎng)殖及散養(yǎng)的共計41頭奶牛的乳樣和糞樣進行檢測，成功檢出Hp DNA。16S rRNA、UreA、glmM于奶牛乳樣中Hp的檢出率分別為58.34％、34.15％、14.63％，而糞樣中16S rRNA、UreA