1、根據(jù)已發(fā)表的豬白細胞介素-2受體γ鏈基因(porcineinterlukin-2receptorγchain)序列(Genbank登陸號：NM214083)設計合成特異性引物，以ConA誘導的榮昌豬外周血淋巴細胞總RNA為模板，用一步RT-PCR方法擴增出約1100bp的目的片段。將目的片斷克隆到pMD18-Tsimpie載體上，酶切鑒定及序列測定結果表明為IL-2Rγ基因。該基因包括豬IL-2Rγ基因全部開放閱讀框1107個堿基，編碼

2、368個氨基酸。將所獲得的榮昌豬IL-2Rγ基因與其他已在NCBI刊載的豬IL-2Rγ基因序列進行核苷酸序列比較，同源性都在99％以上。所擴增的榮昌豬白細胞介素-2受體γ鏈基因序列在Genbank登陸號是Eu026383。 參考榮昌豬Ⅱ-2Rγ基因序列，設計特異性引物，以重組質粒pMD18-T-R一Ⅱ-2Rγ為模板，將榮昌豬Ⅱ-2Rγ不含有信號肽編碼序列的IL-2Rγ基因(Ⅱ-2Rγm)，亞克隆至原核表達載體pET-32a(+)

3、，構建原核表達質粒pET-32a(+)-R-IL-2Rγm。轉化大腸桿菌BL21，1mmol/LIPTG誘導表達4小時后，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定和Western-Blotting分析，原核表達質粒pET-32a(+)-R-IL-2Rγm表達的目的融合蛋白大小為59Kd，占細菌總蛋白的41.8％。 另將完整的ORF區(qū)(IL-2Rγ)基因插入真核表達載體pcDNA3.1(+)，構建真核表達質粒pcDNA3.1(+)-R-IL-2

4、Rγ。轉化大腸桿菌DH5α，經(jīng)雙酶切、質粒PCR鑒定后，大量提取質粒并純化后分三次對小鼠進行免疫，流式細胞儀檢測免疫小鼠T細胞亞群數(shù)量的變化，說明IL-2Rγ具有一定的促免疫細胞增殖反應活性。 本試驗利用RT-PCR技術在國內(nèi)首次克隆出榮昌豬的IL-2受體γ鏈基因，構建了榮昌豬IL-2Rγ成熟蛋白的原核表達系統(tǒng)，實現(xiàn)了榮昌豬IL-2Rγ重組成熟蛋白的高效表達。構建真核表達載體并大量提取和純化質粒，通過免疫小鼠初步測定其生物學活性