1、細(xì)菌原生質(zhì)體融合是一個(gè)隨機(jī)的過(guò)程，通過(guò)標(biāo)記雙親本菌株來(lái)篩選陽(yáng)性融合子。本試驗(yàn)利用了親本菌株在培養(yǎng)特性及耐藥性兩方面存在的差異，標(biāo)記親本菌株對(duì)融合菌株進(jìn)行篩選。
　　通過(guò)藥敏紙片試驗(yàn)和最低抑菌濃度試驗(yàn)(MIC)篩選出兩親本菌株鴨源沙門氏菌(S6)和鴨源巴氏桿菌(CBa)，確定親本菌株藥物標(biāo)記，藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明鴨源沙門氏菌(S6)對(duì)壯觀霉素敏感，抑菌圈為26 mm，鴨源巴氏桿菌(CBa)對(duì)壯觀霉素耐藥，抑菌圈為0mm。通過(guò)測(cè)定最低抑菌

2、濃度(MIC)，確定32μg/ml的壯觀霉素作為選擇培養(yǎng)基的抗生素濃度。壯觀霉素應(yīng)用濃度試驗(yàn)結(jié)果表明，在含32μg/ml壯觀霉素的麥康凱培養(yǎng)基中S6完全不能生長(zhǎng)，在含32μg/ml的新霉素的血瓊脂培養(yǎng)基中CBa能良好生長(zhǎng)。
　　篩選出的親本菌株通過(guò)紫外分光光度計(jì)測(cè)量OD600值繪制CBa和S6的生長(zhǎng)曲線，確定原生質(zhì)體制備時(shí)間:CBa為12-14 h，S6為14-16 h。在溶菌酶的作用下制備原生質(zhì)體，確定制備CBa原生質(zhì)體的最佳溶

3、菌酶濃度為3 g/L，可得到95.25％的原生質(zhì)體制備率以及33.52％的再生率;制備S6原生質(zhì)體的最佳溶菌酶濃度為2.5 g/L，可得到95.32％的原生質(zhì)體制備率以及32.19％的再生率。
　　通過(guò)聚乙二醇(PEG)法進(jìn)行原生質(zhì)體融合，利用抗藥性結(jié)合培養(yǎng)條件對(duì)融合子進(jìn)行篩選，再對(duì)融合菌株進(jìn)行培養(yǎng)特性、菌落形態(tài)、菌體形態(tài)、血清學(xué)試驗(yàn)、穩(wěn)定性檢測(cè)等初步鑒定最終得到5株能夠在32μg/ml壯觀霉素的麥康凱平板上穩(wěn)定遺傳的融合菌株。所

4、得融合子進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)均能凝集雙親菌株陽(yáng)性血清，菌體形態(tài)為中等大小兩端頓圓的革蘭氏陰性桿菌，能夠在麥康凱培養(yǎng)基長(zhǎng)出圓形淡黃色菌落，生化試驗(yàn)結(jié)果表明氧化酶為陽(yáng)性，吲哚、枸櫞酸鈉、蔗糖、乳糖、側(cè)金盞花、硫化氫、氰化鉀均為陰性。
　　根據(jù)CBa的外膜蛋白H(OmpH)基因和S6的外膜蛋白A(OmpA)基因的保守區(qū)域設(shè)計(jì)兩對(duì)引物。利用雙重PCR法檢測(cè)5株融合菌株，結(jié)果表明3株能夠同時(shí)檢測(cè)到雙親本的基因，其余2株則只能檢測(cè)到單一親本基因，雙