1、目的 研究粘附分子PECAM-1、ICAM-3、VCAM-1和CD44在組織淋巴管內皮和培養(yǎng)LECs的表達,通過建立體外三維淋巴管形成模型,研究內皮粘附分子在LECs增殖、遷移和管樣結構形成中的作用.方法 取狗的空腸和腹前壁皮膚,作冰凍切片,用免疫組織化學染色法標記粘附分子在組織淋巴管內皮的表達.分離和培養(yǎng)鉻胸導管的LECs,用免疫熒光染色法標記粘附分子在LECs的表達,在共聚焦激光掃描顯微鏡下觀察.用圖像分析系統(tǒng)分析粘附分子表達的OD

2、值,并與TNF-α或LPS刺激細胞的表達進行比較.內皮細胞用TNF-α或LPS刺激后,分別阻斷PECAM-1、ICAM-3和CD44,計數(shù)細胞增殖數(shù)目和計算細胞遷移率.制備體外三維I型膠原蛋白凝膠淋巴管形成模型,阻斷PECAM-1、ICAM-3和CD44后,觀察管樣結構的形成,測量管樣結構的長度和面積,并在透射電鏡下觀察其特征.結果 小腸和皮膚內的淋巴管內皮PECAM-1和ICAM-3呈免疫反應陽性.培養(yǎng)的LECs表達PECAM-1、I

3、CAM-3和CD44,不表達VCAM-1.用TNF-α刺激LECs表達的OD值與正常對照組無明顯差別,CD44和OD值低于正常對照組.用LPS刺激細胞后,PECAM-1、ICAM-3和CD44表達的OD值均無顯著性變化.用TNF-α或LPS刺激細胞后,VCAM-1呈弱表達.在對照組以及TNF-α和LPS刺激組,阻斷PECAM-1或CD44后,細胞的增殖數(shù)目降低,但阻斷ICAM-3后細胞的增殖數(shù)目無明顯變化.分別阻斷PECAM-1、ICA