1、目的： 細(xì)胞凋亡在椎間盤退變中的意義越來越得到大家的關(guān)注，對于細(xì)胞凋亡機(jī)制的研究也越來越受到重視。低氧誘導(dǎo)因子-1α是20世紀(jì)90年代對氧感受器-信號傳導(dǎo)-效應(yīng)基因的低氧反應(yīng)通路的重要發(fā)現(xiàn)。多數(shù)學(xué)者認(rèn)為HIF-1α是誘導(dǎo)低氧基因和維持細(xì)胞氧內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的核心因子，可以調(diào)節(jié)能量代謝，血管形成，細(xì)胞凋亡，細(xì)胞分化，基質(zhì)合成等相關(guān)基因的表達(dá)。Kee-Yong Ha等人研究發(fā)現(xiàn)在不同程度人突出椎間盤中，HIF-1α的表達(dá)程度與細(xì)胞凋亡程度

2、之間存在高度相關(guān)性，而凋亡程度的增加是否與HIF-1α的高表達(dá)有關(guān)有待于進(jìn)一步研究。本實(shí)驗(yàn)立足于此點(diǎn)，探討培養(yǎng)的髓核細(xì)胞中低氧誘導(dǎo)因子(HIF-1α)表達(dá)程度的不同與細(xì)胞凋亡之間的關(guān)系，進(jìn)而探討低氧誘導(dǎo)因子與間盤退變的關(guān)系。 方法： 取30日齡SD大鼠髓核進(jìn)行原代培養(yǎng)，通過控制培養(yǎng)箱氧濃度誘導(dǎo)低氧誘導(dǎo)因子不同程度表達(dá)，將傳代得到的細(xì)胞分為4組施加處理因素：A組：正常氧條件組：O2 21％，CO2 5％，N2 74％；B組

3、：低氧條件組：O2 5％，CO2 5％，N2 90％(模擬正常間盤環(huán)境)；C組：低氧條件并經(jīng)COCI2誘導(dǎo)組：O2 2％，CO2 5％，N2 93％(HIF-1α高表達(dá)組)；D組：低氧條件并經(jīng)Genistein(酪氨酸蛋自激酶抑制荊)處理組：O2 5％，CO2 5％，N2 90％(HIF-1α表達(dá)受抑制)。各組在各自條件下培養(yǎng)24小時，運(yùn)用westem-blot檢測各組低氧誘導(dǎo)因子表達(dá)量，通過流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡情況。運(yùn)用SP

4、SS11.5軟件對實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行相關(guān)分析。 結(jié)果： 通過細(xì)胞原代培養(yǎng)及純化后得到實(shí)驗(yàn)所需的髓核細(xì)胞，在倒置顯微鏡下觀察可見細(xì)胞呈多角形或梭形，輪廓清楚，細(xì)胞核呈圓形。通過SABC法檢測髓核細(xì)胞中表達(dá)的Ⅱ型膠原，鏡下觀察可見細(xì)胞漿中Ⅱ型膠原被染成棕色，核圓藍(lán)染。通過Western-blot檢測到各個組中均有HIF-1α的表達(dá)，B組和C組HIF-1α表達(dá)明顯多于A組和D組，其中C組表達(dá)最多。各組間具有顯著性差異(P<0.01)

5、。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果可見各組細(xì)胞G0前出現(xiàn)凋亡細(xì)胞峰，C組凋亡率明顯高于各組，D組低于B組和C組。各組之間具有明顯差異(P<0.01)。C組的HIF-1α表達(dá)和凋亡率明顯高于A組和B組，而D組則低于B組和C組。相關(guān)分析提示Pearson相關(guān)系數(shù)為0.668，P<0.001，相關(guān)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。通過本實(shí)驗(yàn)可以得到氧濃度越低，低氧誘導(dǎo)因子表達(dá)的量越多，HIF-1α表達(dá)越高細(xì)胞凋亡率越高，而加抑制劑組細(xì)胞凋亡率較HIF-1α高表達(dá)組低。