1、目的：評價穴位埋線治療變應性鼻炎（Allergic Rhinitis，AR）的臨床療效和安全性，探討穴位埋線對變應性鼻炎機體鼻黏膜神經(jīng)源性炎癥及免疫相關基因表達譜的調節(jié)作用，從臨床和基礎兩方面為為穴位埋線治療AR的臨床運用提供科學依據(jù)。
　　方法：①采用隨機、盲法、對照的臨床研究方法，通過EXCEL軟件RAND函數(shù)產(chǎn)生隨機數(shù)字，將符合納入標準的128名AR受試者分為A組（穴位埋線組）和B組（穴位假埋線組）。兩組均采用相同的取穴方案

2、，每位受試者共接受兩次穴位埋線/假埋線治療，兩次治療間隔2周。以視覺模擬評分量表（visual analogue scale，VAS）積分及鼻眼結膜相關生活質量問卷調查量表（Rhinocoujunctivitis Quality of Life Questionaire）（中文版自測版本）積分為主要的療效評價指標，以鼻內鏡檢查，以及血清特異性IgE、IL-4、IL-10、IL-12、IFN-γ及VCAM-1等實驗室檢測指標作為第二療效評

3、價指標，治療期間的合并用藥情況、受試者的不良反應也將被記錄。在治療前、治療結束后4周（血清學指標該時間點未行檢測）、治療后8周不同時間點隨訪受試者，評價穴位埋線/假埋線的臨床療效及安全性。②以卵清蛋白致敏SD大鼠的方法制作變應性鼻炎動物模型,分為治療組A和對照組B，另設空白組C。每組各15只SD大鼠。A組迎香穴（LI20）埋線，B組不行任何治療。A組大鼠行迎香穴穴位埋線治療。治療后10天，同時取各組大鼠鼻黏膜組織，行HE染色及感覺神經(jīng)肽

4、—P物質(substance P,SP)、降鈣素基因相關肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）和神經(jīng)激肽A(neurokinin A，NKA）的免疫組織化學染色。觀察以下內容：造模及治療期間大鼠變應性鼻炎相關的行為學評分變化；光鏡下每張切片以嗜酸性粒細胞浸潤情況為主的炎癥病變情況；感覺神經(jīng)肽免疫組化染色情況及積分光密度值（iOD）的測定情況。③采用方法2中同樣的造模、分組及干預方法，每組SD大鼠各

5、3只。A組大鼠第二次迎香穴埋線后取各組大鼠鼻黏膜，經(jīng)RNA抽提、純化、質量檢測、cDNA合成后，以第二代功能分類 Real-time PCR芯片----The Rat Inflammatory Response&Autoimmunity RT2 Profiler?PCR Array（含84個目標基因）研究穴位埋線治療后鼻黏膜免疫相關基因表達譜的改變情況，并以ΔΔCt方法進行三組間兩兩比較的數(shù)據(jù)分析。
　　結果：⑴2組受試者的人口學

6、特征、生命體征、病史病情等基線資料具有可比性。⑵VAS量表評價結果顯示：2組受試者穴位埋線/假埋線在治療后4周、治療后8周與治療前相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。而兩組受試者間橫向比較，在治療后4周無組間差異(P=0.753)，治療后8周組間的差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。⑶RQLQ問卷調查表的結果顯示：2組受試者穴位埋線/假埋線在治療后4周、治療后8周與治療前相比，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。且兩組受試者間

7、橫向比較，在治療后4周、治療后8周組間的差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。⑷鼻內鏡檢查結果：2組受試者鼻黏膜顏色的變化，治療后4周與治療前相比，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.470)；但治療后8周與治療前相比，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。鼻分泌物、下鼻甲大小，2組治療后4周及治療后8周行自身前后對照，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。2組受試者的組間橫向比較，下鼻甲大小及鼻分泌物評分項，在治療結束后4周、8周，A、B兩組間的差異

8、均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但鼻黏膜顏色項，在各療效評價點的組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.200）。⑸實驗室檢測指標：組內自身前后對照，A、B組的血清特異性 IgE在治療前后的差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），而其余指標的變化在治療前后無統(tǒng)計學差異（P＞0.100）。組間橫向比較，A、B組間的血清特異性 IgE在治療前及治療后的組間差異均具有統(tǒng)計學意義；而其余實驗室檢測指標在治療前、治療后8周兩個時間點的組間差異無統(tǒng)計學意義（P＞0

9、.05）。⑹對大鼠變應性鼻炎相關的行為學評分的影響：對組間噴嚏、流涕、抓撓單個條目分別進行單因素方差分析，按照α=0.05的檢驗水準，三組間變應性鼻炎行為學的差異有統(tǒng)計學意義（P≤0.01）。以LSD法行組間兩兩比較時，行為學評分的差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。⑺鼻黏膜HE染色結果：光鏡下，變應性鼻炎對照組(B組)鼻黏膜纖毛倒伏、脫落，查見大量嗜酸性粒細胞及少量淋巴細胞浸潤。穴位埋線組（A組）少量上皮脫落，腺體輕度增生，炎癥反應較

10、B組有所減輕?？瞻捉M(C組)纖毛整齊無脫落，未見明顯嗜酸性粒細胞及異染細胞浸潤。⑻感覺神經(jīng)肽免疫組化及積分光密度值測定結果：A、B、C三組大鼠鼻黏膜的SP、CGRP、NKA的免疫組化染色均呈現(xiàn)出了B組鼻黏膜細胞內棕黃色陽性顆粒較多，甚至成片分布；A組次之；C組最少的趨勢。積分光密度值經(jīng)兩兩比較，差異均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.001）。⑻本研究提取的9個樣本提取的鼻黏膜RNA合符要求。⑽PCR檢測中擴增曲線中大部分Ct值均在20～35范圍

11、內，曲線拐點清楚，特別是低濃度樣本指數(shù)期明顯，基線平而無上揚現(xiàn)象，各孔的擴增曲線平行性好，表明各反應管的擴增效率相近。擴增曲線的結果表明該 PCR反應體系和反應程序設置合理。⑾各樣本每個PCR產(chǎn)物的熔解曲線均為單峰，表示擴增產(chǎn)物單一，無非特異性擴增產(chǎn)物。⑿B組的檢測值（2^-ΔCt）與A組檢測值（2^-ΔCt）相比，在這些免疫反應相關基因中，有2個上調基因，這2個基因的組間差別無統(tǒng)計學意義；下調倍數(shù)大于3或下調倍數(shù)具有統(tǒng)計學意義的基因有

12、基因有17個，其中組間差異具有統(tǒng)計學意義的下調基因有10個。⒀C組的檢測值（2^-ΔCt）與B組檢測值（2^-ΔCt）相比，得出:在這些免疫反應相關基因中，無上調基因；下調倍數(shù)大于3基因有23個，這些基因的組間差異均無統(tǒng)計學意義。⒁C組的檢測值（2^-ΔCt）與A組檢測值（2^-ΔCt）相比，得出:在這些免疫反應相關基因中，無上調基因；下調倍數(shù)大于3的基因有44個，其中9個下調基因的組間差異有統(tǒng)計學意義。
　　結論：①穴位埋線及假

13、埋線均有助于改善變應性鼻炎患者的癥狀（VAS評分）及相關的生活質量（RQLQ評分）。但穴位埋線組由于有埋入線體的持續(xù)刺激，該組受試者的癥狀（VAS評分）及相關的生活質量（RQLQ評分）改善較假埋線組更持久。穴位埋線也有助于改善受試者的鼻黏膜顏色、鼻分泌物、下鼻甲的腫脹情況，以及受試者治療前后血清特異性 IgE的表達情況，但對參與免疫反應的其他細胞因子無改善作用。②穴位埋線可能通過改善感覺神經(jīng)肽參與的鼻腔神經(jīng)源性炎癥而減輕變應性鼻炎的狀況

14、。但穴位埋線治療的AR大鼠模型組，經(jīng)治療，癥狀雖較治療前緩解，但與空白組相比，組間感覺神經(jīng)肽的表達差異仍有統(tǒng)計學意義，提示雖然沒有明顯癥狀，但是黏膜的炎癥狀態(tài)仍在持續(xù)。③利用功能性分類基因芯片技術有的放矢地對穴位埋線治療的變應性鼻炎動物的鼻黏膜的免疫相關基因表達譜進行差異表達基因的篩選是可行的。與全基因表達譜芯片的研究相比，該方法能夠更為快速、準確地篩選出目標基因，進而為穴位埋線治療變應性鼻炎的治療方法提供理論依據(jù)，并為進一步的研究指明