1、論文Ⅰ MicroRNA-21在高糖誘導巨噬細胞凋亡中作用的研究
　　背景:
　　微小RNA(MicroRNA，miRNA)最先是由Ruvkun G在線蟲中發(fā)現(xiàn)的具有調(diào)節(jié)細胞發(fā)育時序功能的小分子RNA。多項研究已證明，miRNAs參與了細胞增殖、分化、凋亡、腫瘤形成等多種生物學過程的基因表達與調(diào)控。研究發(fā)現(xiàn)microRNA-21（miR-21）在多種心血管疾病中的表達均增加，并參與了細胞增殖和分化等過程。研究發(fā)現(xiàn)在動脈粥樣斑

2、塊中miR-21的表達上調(diào)，但miR-21參與粥樣硬化的機制仍需進一步研究。巨噬細胞在易損斑塊形成、發(fā)展及破裂中的作用已被廣泛研究，巨噬細胞凋亡的機制目前尚在研究中，目前的研究發(fā)現(xiàn)多種信號傳導通路參與了巨噬細胞的凋亡。研究發(fā)現(xiàn)miR-21可通過下調(diào)PDCD4的表達來促進細胞增殖。另外，miR-21的過表達可以抑制正常細胞凋亡信號傳導，抑制miR-21可促進細胞凋亡。
　　目的:
　　研究miR-21在高濃度葡萄糖作用下巨噬細

3、胞中的表達情況，并探討miR-21在高濃度葡萄糖刺激下抑制巨噬細胞凋亡的作用機制。
　　方法:
　　1.細胞培養(yǎng)及處理:應用含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，培養(yǎng)Raw264.7細胞50ml細胞培養(yǎng)瓶中，37℃細胞培養(yǎng)箱中孵育。細胞生長至近匯合狀態(tài)時用細胞刮刀刮除細胞，重新種植于6孔或12孔板中。Raw264.7細胞生長至融合的70％-80％時，換1％血清的DMEM培養(yǎng)液，37℃繼續(xù)孵育過夜，使細胞進入生長靜止期，隨后進行干

4、預。應用不同濃度的葡萄糖(5.5mmol/L、25mmol/L)及甘露醇(25mmol/L)分別處理Raw264.7細胞24小時。
　　2.實時定量PCR方法:應用實時定量PCR(RT-PCR)方法檢測Raw264.7細胞miR-21及 PDCD4、Caspase-3、PTEN(phosphatase and tensin homolog deletedon chromosome ten，磷酸酶基因)mRNA的表達情況。
　

5、　結(jié)果:
　　1.為研究高濃度葡萄糖對巨噬細胞中miR-21表達的調(diào)節(jié)作用，Raw264.7細胞在無血清的狀態(tài)下，用25mmol/L葡萄糖和25mmol/L甘露醇分別刺激細胞0h、1h、3h、6h、12h、24h后收集細胞，檢測miR-21的表達量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，HG可有效刺激Raw264.7細胞miR-21表達上調(diào)，而甘露醇高滲刺激巨噬細胞miR-21表達降低。HG刺激巨噬細胞miR-21表達增加上調(diào)還隨刺激時間的增加而逐漸增加，提

6、示HG刺激巨噬細胞miR-21表達的上調(diào)呈時間依賴性。與甘露醇高滲組相比，H6處理細胞1h后miR-21表達開始明顯增加(P＜0.01)，6h時miR-21表達達到高峰(P＜0.01)，12h后表達開始降低。
　　2.為了研究HG對Raw264.7細胞中PDCD4 mRNA表達的影響，Raw264.7細胞用葡萄糖和甘露醇分別處理細胞0h、6h、12h、24h、48h、72h后，檢測PDCD4 mRNA的表達量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在12h時

7、HG刺激使Raw264.7細胞PDCD4 mRNA表達量明顯下降(P＜0.05)，24h之后其mRNA表達量開始增加(P＜0.01)，而甘露醇在6h時可引起PDCD mRNA顯著增加(P＜0.01)，之后對PDCD4的作用不明顯。這表明HG對巨噬細胞PDCD4 mRNA表達的影響也刺激時間有關(guān)，12h之前降低其表達，之后表達增加。Western Blot進一步證實，HG處理巨噬細胞12h后，PDCD4蛋白表達量亦顯著增加。本實驗同時發(fā)現(xiàn)

8、，HG可引起巨噬細胞PTEN mRNA和蛋白表達在12h內(nèi)PTEN表達量明顯下降(P＜0.05)。
　　3.為了研究高濃度葡萄糖對巨噬細胞凋亡的影響，Raw264.7細胞分別用HG和甘露醇孵育不用時間后(0h、24h、48h)，用裂解細胞提取細胞蛋白質(zhì)，westernblot檢測活化caspase-3的蛋白表達量。結(jié)果顯示，與甘露醇組相比，HG能明顯增加活化caspase-3蛋白表達量。HG處理Raw264.7細胞24h后，活化c

9、aspase-3蛋白表達量開始明顯增加，48h時表達量增加更明顯。HG處理Raw264.7細胞0h、24h、48h后，流式細胞儀檢測巨噬細胞的凋亡情況。結(jié)果表明，與對照組相比，HG組巨噬細胞的凋亡明顯增加，且呈時間依賴性。本實驗同時發(fā)現(xiàn)，隨著HG刺激時間的延長，壞死的細胞也逐漸增多。
　　結(jié)論:
　　1.miR-21在高濃度葡萄糖誘導的Raw264.7巨噬細胞中表達增加，這種表達上調(diào)呈時間依賴性。
　　2.miR-21

10、通過調(diào)節(jié)其靶基因PDCD4對高濃度葡萄糖誘發(fā)的巨噬細胞凋亡起保護效應。
　　論文Ⅱ 匹伐他汀鈣對高膽固醇血癥患者左心房功能的影響
　　背景:
　　心血管疾病是我國目前人群死亡的首位死亡原因，近年來我國冠心病的發(fā)生率及死亡率逐漸上升。研究表明，血清總膽固醇及低密度脂蛋白膽固醇水平的升高是冠心病和缺血性腦卒中發(fā)生的獨立危險因素之一，因此，對高膽固醇血癥患者的防治必須給予高度重視。
　　3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還

11、原酶抑制劑(HMG-CoA)，俗稱“他汀類”，可通過抑制肝細胞內(nèi)的膽固醇合成限速酶，降低膽固醇的合成，并通過增加低密度脂蛋白受體的表達來降低循環(huán)中低密度脂蛋白的水平。研究表明，患者從他汀類藥物的臨床獲益絕大部分是通過其降脂作用，同時這些藥物可在心血管疾病的多方面發(fā)揮其非降脂作用，包括改善內(nèi)膜功能、增強動脈粥樣硬化斑塊的穩(wěn)定性、降低氧化應激及炎癥反應，抑制血管壁的血栓形成、抑制心肌纖維化等。
　　研究表明高膽固醇血癥患者心房纖顫的發(fā)

12、生率增高。左心房有儲存器功能、管道功能及助力泵功能這三個功能，通過這三個功能，左心房可在生理及各種病理狀態(tài)下發(fā)揮其作用。應用應變/應變率技術(shù)可評價高血壓、代謝綜合征、肥胖患者等的左心房功能，且應用此技術(shù)測定的心肌功能可以準確反映心肌本身的收縮舒張?zhí)匦?，同時并不受周圍組織牽拉影響。本研究擬采用應變/應變率技術(shù)評價高膽固醇血癥患者左心房功能的變化，并研究應用匹伐他汀鈣后，高膽固醇血癥患者左心房功能的變化。
　　目的:
　　應用應

13、變/應變率技術(shù)評價高膽固醇血癥患者左心房功能的變化，評價匹伐他汀鈣對高膽固醇血癥患者左心房功能的影響。
　　方法:
　　本實驗設計為雙盲隨機研究，選取高膽固醇血癥病人40例，根據(jù)匹伐他汀鈣的用藥量隨機分為1mg劑量組和2mg劑量組，各20例。高膽固醇血癥的診斷標準為:空腹血清總膽固醇(TC)水平為5.72mmol/L≤TC≤12.7mmol/L和/或空腹低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水平為3.64mmol/L≤TC≤6.5

14、mmol/L。選取與之年齡、性別相匹配的正常對照30例。
　　結(jié)果:
　　1.對照組與高膽固醇血癥組治療前、后臨床基本指標比較
　　五組患者性別、年齡、身高、心率無統(tǒng)計學差異;高膽固醇血癥組2mg劑量組治療前、后體重及腰圍較對照組增高，高膽固醇血癥組體重指數(shù)與對照組比較有統(tǒng)計學差異;高膽固醇血癥組收縮壓、舒張壓、脈壓及平均動脈壓較對照組增高;高膽固醇血癥1mg劑量組及2mg劑量組治療后ALT較對照組增高，2mg劑量組治

15、療前后rGGT較對照組增高，2mg劑量組治療前AKP與AST較對照組略增高(P＜0.05)，高膽固醇血癥組1mg、2mg劑量組治療前后TP、ALB較對照組均增高;高脂血癥組治療前TC、TG、LDL-C均較對照組明顯增高，應用匹伐他汀治療8周后，TC、TG、LDL-C均較治療前明顯降低，并與對照組無統(tǒng)計學差異，HDL-C水平治療前后無統(tǒng)計學差異;高膽固醇血癥1mg劑量組治療前肌酐水平略高于對照組(P＜0.05)。
　　2.正常組與高

16、膽固醇血癥組治療前基本超聲心動圖資料的比較
　　比較發(fā)現(xiàn):高膽固醇血癥1mg劑量組治療前、后LA左右徑較對照組增大，2mg劑量組LV內(nèi)徑大于對照組(P＜0.05);2mg劑量組治療前、后A峰與對照組比較增高(P＜0.05);2mg劑量組治療前、后E/Em與對照組比較增高。 LA前后徑、AO、RV、LVEF、E峰、E峰/A峰、Em、Am、Em/Am比較無統(tǒng)計學意義。
　　3.對照組與高膽固醇血癥組治療前后心房功能指標的比較

17、r>　　高膽固醇血癥1mg劑量組及2mg劑量組治療前S、SSR及ESR均低于對照組(P＜0.05)，ASR無明顯差異;應用匹伐他汀鈣不同劑量治療8周后，ESR均較治療前有明顯改善(P＜0.05)。1mg劑量組及2mg劑量組治療后ASR較對照組降低(P＜0.05)。進一步比較匹伐他汀鈣1mg劑量組及2mg劑量組，發(fā)現(xiàn)兩種不同劑量匹伐他汀鈣組心房功能改變無統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論:
　　1.高膽固醇血癥患者心房功能較正常者心房存儲