1、隨著生物技術的發(fā)展，植物種子不但是傳統(tǒng)農(nóng)產(chǎn)品的載體，還是高價值化學品和醫(yī)藥產(chǎn)品的載體。通過基因工程定向改變植物種子成分成為本世紀農(nóng)業(yè)科技創(chuàng)新的重要組成部分。
　　 植物種子特異表達啟動子是植物種子基因調控不可缺少的基因元件。啟動子的組織特異性、作用強弱和時空表達特點是對基因進行精確調控的關鍵。本研究的目的是從油菜中克隆種子特異表達啟動子pNapB和pFAE1，對他們的序列結構、作用強度和時空表達特點進行比較研究。
　　

2、通過同源序列法從油菜品種中油821中分離得到油菜種子儲藏蛋白基因NapB和油菜脂肪酸延長酶基因FAE1的上游啟動子序列pNapB和pFAE1，其中pNapB長1136 bp，pFAE1長1420 bp。生物信息學分析表明，兩種啟動子的核苷酸序列都含有種子特異表達啟動子的順式作用元件，包括RY重復、G-box和E-box等，但兩種啟動子順式作用元件的序列分布不同。NapB啟動子序列分析發(fā)現(xiàn)具有ABA應答元件中的distB 和proxB,也

3、被稱為B-boxABA應答復合物以及GCN4模序，而FAE1啟動子序列分析沒有發(fā)現(xiàn)典型的B-box ABA應答復合物和GCN4模序。
　　 將pNapB和pFAE1兩個啟動子分別與報告基因GUS融合并通過農(nóng)桿菌介導法導入煙草，得到大量轉基因煙草植株。組織化學分析表明，兩種啟動子基本上是種子特異性表達的，但是都有滲漏表達，并且它們在種子中作用的時間和空間分布以及作用強度明顯不同。pNapB啟動子比pFAE1作用開始的時間早，持續(xù)時

4、間長，在早期作用比pFAE1強，但pFAE1啟動子在種子發(fā)育中期啟動速度快，成熟種子的GUS染色深度在兩種啟動子間差別不大。熒光定量PCR分析表明，pNapB-GUS mRNA在開花后12天開始表達，而pFAE1-GUS mRNA的表達開始較晚。pNapB-GUS mRNA的最高表達量是pFAE1-GUS mRNA的20倍。
　　 將pNapB和pFAE1兩個啟動子分別與報告基因GUS融合并通過農(nóng)桿菌介導法導入油菜中，只得到了p

5、FAE1啟動子的轉化植株。對T1代轉基因油菜進行組織化學分析結果表明，除了油菜種子外，在葉片和根部也能微弱的染上藍色，說明本研究中pFAE1啟動子的種子特異性不是很強。轉pFAE1-GUS基因的油菜在開花后25天時種子的珠柄處開始染上藍色，隨著種子的成熟，胚珠被染上藍色并逐漸加深，但是種皮不能染上顏色。
　　 利用RT-PCR技術對不同發(fā)育時期油菜種子中的內源FAE1和NapB基因表達模式進行分析，結果表明，NapB mRNA的