1、MADS-box基因是一類廣泛存在于植物界的基因家族，是植物生長發(fā)育過程中非常重要的調控因子，如參與調節(jié)營養(yǎng)生長、種皮發(fā)育、子房發(fā)育、胚形態(tài)建成、根的形成和共生誘導等。目前對MADS-box基因調控機理的研究已成為植物分子生物學領域中的一大熱點。AGL6亞家族基因屬于MADS-box基因MIKC家族，為AP1/A GL9組的一個遺傳冗余基因。研究表明AGL6基因是與花器官發(fā)育相關的基因。
　　重慶市花卉工程技術研究中心在前期工作中

2、已從蠟梅(Chimonanthus praecox(L.) Link)中克隆了CpAGL6基因(GenBank登錄號為FJ807387)，長度為948 bp。提取蠟梅不同組織和不同時期花芽RNA進行RT-PCR分析，發(fā)現該基因在蠟梅花器官中特異表達，并且參與花原基的形成等。啟動子是轉錄水平上的一個重要調控元件，通過與多種轉錄因子相結合，進而決定了基因的時空表達模式及表達強度。目前，AGL6基因已被大量分離并研究，但是還未見到AGL6基因

3、啟動子研究的相關報道。為了弄清CpAGL6基因啟動子在植物體內的表達特性，我們從蠟梅中克隆得到了該基因的上游調控序列，并對啟動子的功能進行了初步分析，本文主要研究內容和結果如下:
　　1.在CpAGL6基因ORF的5'端設計三條巢式引物，利用hiTAIL-PCR法從蠟梅基因組中克隆到花發(fā)育相關基因CpAGL6翻譯起始位點上游1266 bp的啟動子序列。生物信息學分析表明，該啟動子序列中包含啟動子的基本元件TATA-box和CAAT

4、-box及多個與植物非生物脅迫相關的響應元件。
　　2.為進一步分析CpAGL6啟動子的功能，構建了該基因啟動子與GUS基因融合的植物表達載體，并用農桿菌介導法轉化煙草。在煙草葉片中的瞬時表達結果表明該啟動子序列具備驅動報告基因GUS表達的功能。
　　3.將經卡那霉素(Kanamycin)篩選后的抗性苗，進行GUS組織化學染色分析和PCR分子驗證，獲得轉基因煙草株系。
　　4.對轉基因煙草進行GUS組織化學染色及GUS

5、酶活性定量檢測，結果顯示，CpAGL6基因啟動子能夠驅動GUS基因在轉基因煙草的葉，莖和花中表達，并且在不同花期表達強度存在差異，根中幾乎不表達。結果表明，CpAGL6啟動子主要驅動GUS報告基因在花器官和綠色器官組織中表達。
　　5.轉基因植株經黑暗、赤霉素(GA3)和低溫處理后，GUS酶活力均有所增加。結果表明，CpAGL6啟動子可能在抵抗非生物脅迫中起到非常重要的作用。
　　6.對T2代轉基因煙草幼苗進行GUS時間表達