1、目的：1利用分子生物學技術在既往被診斷為肥厚型心肌病的患者中篩選Anderson Fabry病患者，從而分析該病被誤診為肥厚型心肌病的情況；2篩選該病的致病突變：3通過與國外相關資料相比較，探討中國漢族人群與國外患者的發(fā)病率的差異；4對基因型與臨床表型之間的關系進行分析，探討兩者之間的聯(lián)系；5建立一種在基因水平上對Anderson Fabry患者進行臨床前期診斷的方法。 方法：1．臨床收集的102例既往診斷為肥厚型心肌病

2、的患者(均為山東大學齊魯醫(yī)院門診及住院患者)，在知情同意的的前提下抽取外周靜脈血約2mL，提取白細胞，利用酚一氯仿法抽提基因組DNA，另選100名健康志愿者作為正常對照； 2．聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)擴增GLA基因相應的七個外顯子，對擴增產(chǎn)物進行1.5％瓊脂糖凝膠電泳以了解擴增的效率及特異性；3．利用單鏈構象多態(tài)性分析(Single strand conformationpolymor

3、phism，SSCP)分析PCR擴增產(chǎn)物，處理后的產(chǎn)物行8％及10％非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，銀染法顯色觀察結果；4．根據(jù)同一塊膠上電泳條帶遷移率的差異判斷是否有陽性結果，出現(xiàn)異常條帶者擴增其全部外顯子及相鄰的部分內(nèi)含子序列，應用低熔點膠回收后送公司測序；5．對基因突變陽性者進行家系調(diào)查，并對突變陽性家族成員檢測a-半乳糖苷酶活性；6分析基因?qū)W改變與臨床表型之間的關系。 結果：1．成功地對102例肥厚型心肌病患者及100例正常

4、對照者的GLA基因的七對外顯子進行了PCR擴增； 2．全部擴增產(chǎn)物均經(jīng)過兩種條件下的單鏈構象多態(tài)性分析(SSCP)進行基因突變的篩選，通過反應條件的調(diào)整，每一個PCR產(chǎn)物均形成清晰的單鏈條帶，與正常人相應的單鏈帶進行了比較分析； 3．三例患者的SSCP分析出現(xiàn)異常條帶，經(jīng)測序發(fā)現(xiàn)均為點突變。其中一例患者的第1168位(EMBL X14448.1)G突變?yōu)锳/G雜合;一例患者第1170位G突變?yōu)锳；最后一例患者的第1194位C突變?yōu)門

5、/C雜合。前兩種突變導致了mRNA5’非蛋白質(zhì)編碼區(qū)的序列改變，最后一種為a一半乳糖苷酶信號肽的同義突變。4.分析顯示G1170A．突變攜帶者a-半乳糖苷酶活性明顯降低，在其家族成員中未能發(fā)現(xiàn)該致病突變；而1168位雜合突變患者的家系分析顯示其母親及兩個女兒均攜帶該種突變，但其酶活性降低不一，癥狀亦較輕。 結論：1在本研究中，我們共篩選出兩種新的致病突變位點?，F(xiàn)今已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了300余種Fabry致病突變，但是由于GLA基因mRNA

6、5’端非蛋白質(zhì)編碼區(qū)突變而導致該病尚為首次報道。2中國漢族人群Anerson Fabry病的發(fā)病率可能高于國外相應報道。3基因型與表現(xiàn)型的關系的分析顯示，不能簡單的由基因型來推導臨床表型，反之亦然。4 PCR-SSCP銀染技術對于Anderson Fabry病基因突變的檢測是適宜的，并可以進行推廣。5在臨床實踐中，Anderson Fabry病患者易被誤診為肥厚型心肌病，因而我們對于超聲檢查呈現(xiàn)非對稱性室間隔肥厚的患者應該加大警惕，考慮